肝干细胞第研究进展2006.docVIP

1肝干细胞的研究进展 　　1.1肝干细胞(hepatic stem cell, HSC)目前认为来源于前肠内胚层，在胚胎发育过程中，以肝细胞的形式存在，参与了肝脏严重损害后肝细胞的再生和修复,并在这一过程中起到至关重要的作用. 　　1.2肝干细胞的分类 　　1.2.1肝源性 　　1.2.1.1肝卵原细胞肝干细胞在成年哺乳类动物肝脏中，以小卵原形细胞的形式存在于终末小胆管(Hering管)，又称肝卵原细胞 (hepatic oval cell, HOC),以往文献亦称为胆小管肝细胞(ductular hepatocyte)、胆道肝细胞(biliary hepatocyte)、过渡细胞(transitional cell)、肝细胞样细胞(hepatocytelike cells)［1,2］等. 其特殊的形态学特征是胞体小，核大呈卵原形，胞质少，细胞表面高度表达OV6、白蛋白、CK19及CK7［3］等标志. Coleman等［4］在肝脏大部分切除的模型中看到卵原细胞大量增生，这很显然是某些调节机制在起作用. 最近的研究使人们相信卵原细胞在肝细胞癌和胆管癌的病情发展中扮演着重要角色，但是还没有支持这一说法的直接证据，因此成为人们争论的焦点. 现已经证明，卵原细胞的大量增殖是肝脏严重受损的表现，这或许使人联想到和肝脏肿瘤的发生有关. Bisgaard等［5］通过实验发现致癌物2乙酰氨基芴（2AFF）及其类似物2－氨基芴(2AF)和NOH2AAF能够促进成年大白鼠卵原细胞快速的有丝分裂，使细胞迅速从Go期进入S期（该过程又叫干细胞活化）. 同时Bisgaard等［5］还发现，对于肝脏的转录因子（HNF1 beta, HNF3 gamma, HNF4）和遗传因子（AFP 和白蛋白），致癌物可促进HNF1 beta, HNF3 gamma, AFP和白蛋白的表达，对HNF4的表达影响不明显，似乎进一步证明了卵原细胞和肝细胞存在一定关系，即卵原细胞是肝细胞和胆管细胞的前体细胞. Yoon等［6］通过给实验大鼠喂经二乙基亚硝胺和2乙酰氨基芴等处理过的食物 ,在组织病理学、组织化学、免疫组织化学、电子显微镜等方面观察肝细胞结构的改变，提出肝卵原细胞转化为肝细胞有两种不同的途径:①胆小管样卵原细胞通过典型胆小管或腺泡样肝细胞转化为肝细胞;②部分卵原细胞通过小肝细胞分化成肝细胞. Alison等［7］也报道过，卵原细胞将最终转化为肝细胞和胆道上皮细胞(biliary epithelial cells, BEC). 　　1.2.1.2小肝细胞He等［3］的研究证明卵原细胞先变成小肝细胞再分化为成熟肝细胞，与卵原细胞可通过形态学（细胞核呈圆形，多核）和缺少CK19 mRNA表达来鉴别. 小肝细胞多在肝脏严重损伤的情况下出现，在肝内没有确切的定位. 有待于进一步研究. 　　1.2.1.3胚胎干细胞(embryonic stem cells, ESC)胚胎干细胞在培养中，增殖能力不完全相同. 它能分化成各种组织. Zheng等［8］介绍通过流动细胞计数法和单细胞测定法来鉴别胚胎干细胞，并通过免疫组织化学等方面说明胚胎干细胞可产生卵原细胞. Hu等［9］将BALB/a小鼠的胚胎干细胞加入到含白血病抑制因子(LIF) 1×106 U/L的DMEM培养基，然后把LIF从DMEM中除去，使胚胎干细胞转化成胚胎肝，再把胚胎肝放入含生长因子（aFGF, HGF）的培养基，用相差显微镜观察发现:在LIF存在时胚胎干细胞复制没变化，去除LIF时胚胎干细胞转化成胚胎肝. 在转化成胚胎肝过程中，在第8日第一次测到AFP,浓度为3.4 μg/L; 到第15日时,浓度增加到22.8 μg/L. 在第11日第一次测到白蛋白（ALB）,浓度为0.2 g/L，在第15日时浓度增加到2.2 g/L，且ALB（＋）的细胞在免疫细胞化学的形态结构上已经与正常鼠的肝细胞一致. Hamazaki等［10］报道在不加入生长因子进行培养时胚胎干细胞表达特有的内胚层基因，如α1胎儿蛋白、甲状腺运载蛋白、α1抗胰蛋白酶和ALB. 如果加入生长因子，胚胎干细胞表达在胚胎肝发育后期的标志，如酪氨酸氨基移换酶(TAT)、葡萄糖6磷酸［酯］酶(G6P)，而且目前认为TAT，G6P的表达是在SEK1基因（在肝的形态发生学早期给肝细胞提供一个生存信号）的诱导下发生的，实验表明体外的胚胎干细胞有分化成为肝细胞的潜能. Monga等［11］ 报道说利用胚胎的肝培养分化出了肝干细胞. 在特殊的条件下鼠胚胎肝脏移植体培养时， 在第9.5日时，加入肝细胞生长因子，用PRAJA标记的方法发现肝祖细胞在胚胎肝脏移植体内呈集落生长. 　　1.2.2非肝源性 　　1.2.2.1骨髓/造血细胞来源的肝干细胞最近有资料表明骨髓干细胞可能