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植物组织培养练习题 植物组织培养：指要人工控制的条件下，将植物体的任何部分，或器官、或组织、或细胞，进行离体培养，使之发育形成完整植物体。所谓人工控制的条件，即营养条件和环境条件；植物体的任何一部分是指根、茎、叶、花、果、实以及它们的组织切片和细胞。 愈伤组织培养：将外植体接种在人工培养基上，由于植物生长调节剂的存在，而使其细胞脱分化形成愈伤组织，然后通过再分化形成再生植株。 外植体：植物组织培养中的各种接种材料，包括植物体的各种器官、组织、细胞和原生质体等。 脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。 5、接种：把经过表面灭菌后的外植体切碎或分离出器官、组织、细胞，转放到无菌培养基上的全部操作过程。 6、褐变：外植体在培养过程中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，这种致死性的褐化物不但向外扩散使培养基逐渐变成褐色，而且还会抑制其他酶的活性，严重影响外植体的脱分化和器官分化，最后变褐而死亡的现象。 植物组织培养根据培养方式分为固体培养和液体培养。 2、植物组织培养类型分为愈伤组织培养、器官培养、胚培养、细胞和原生质体培养。 3、组织培养的主要应用领域有快速繁殖、脱毒、体细胞无性系变异和新品种培育、单倍体育种、种质保存、遗传转化、次生代谢物的生产等几个方面。 4、茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为快速繁殖和脱毒培养两种类型。 5、一般组织培养的几道工序如下：培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和高压灭菌；无菌操作——材料的表面灭菌和接种，培养；试管苗的驯化、移栽与初期管理。 6、在进行植物组织培养室设计时，其设计应包括洗涤室、准备室、灭菌室、无菌操作室、培养室、细胞学实验室、摄影室等分室，另加驯化室、温室和大棚。 7、培养基的成分主要包括无机营养、氨基酸、有机附加物、维生素、糖、琼脂、激素、活性炭、PH。 8、植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 9、细胞全能性是指植物的每一个细胞都携带有一完整的基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。 10、玻璃化现象是指试管苗的一种生长失调症状，当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。其苗称为玻璃化苗。 11、液体培养是将培养物方在液体培养基中培养，又称为液体震荡培养。 三、 1、简述培养基的配制、分装、包扎和灭菌。 答： （1）确定培养基的配方。 （2）贮备液（或母液）的配制与保存 配一些浓溶液，用时稀释，这种浓溶液叫贮备液或母液。按药品种类和性质分别配制，单项、单独保存或几种混合保存。一般应按配方顺序依次称量，分别溶解在少量蒸馏水中，最后再依次加到一起，并定容到规定体积。贮备液配好后贴上标签，保存在冰箱中。 （3）配制培养基 ●先在洁净的不锈钢锅理放入约750ml蒸馏水，加入所需要的琼脂和糖，最好能在水浴锅理将琼脂溶化，如直接加热应不停地搅拌，防止在锅底烧焦或沸腾溢出。 ●按需要加入相应量的母液。 ●按需要加入相应量的植物激素和其它物质。加蒸馏水定容， ●充分混合好后，用1NKOH（或NaOH）调整PH值到所需值。 （4）分装：按容器的大小和培养要求，趁热将适量培养基分注到三角瓶或试管中，并即刻用封口膜封住瓶口。 （5）灭菌：压力108kPa，温度121度，时间15—30分钟。 2、什么叫接种？简述无菌操作注意事项。 答：把经过表面灭菌后的外植体切碎或分离出器官、组织、细胞，转放到无菌培养基上的全部操作过程叫接种。无菌操作注意事项好下： （1）进无菌室之前，操作人员需着经灭菌的白色工作服，戴口罩。操作人员双手必顺进行灭菌。 （2）操作期间经常用70%的酒精擦拭双手和台面。 （3）在打开培养瓶、三角瓶或试管时，最大的污染危险是管口边沿的微生物落入管内。 （4）工具用后及时灭菌，避免交叉污染。 （5）工作人员的呼吸也是污染的主要途径。 （6）由于空气中有灰尘，因此在操作时，仍要注意避免灰尘的落入。 3、植物组织培养室的核心是无菌室（又叫接种室），怎样进行无菌室的灭菌 ？ 答： （） ●用70%酒精（或0.1%新洁尔灭）朝天花板、四周墙壁方向喷洒； ●待整个室喷洒完毕后依次用70%酒精将台子揩一遍； ●用湿拖把（70%酒精打湿），把地板拖一次； ●然后将无菌室的门关闭，开紫外灯，照射5~30分钟； ●0.5~2小时后进入室内操作，待工作完毕后，将室门打开换气。以后每用一次灭菌一次。 （2）无菌室发现霉斑（墙上）时的灭菌 ●用70%酒精擦一遍（里里外外）； ●用新配70%酒精重复再擦一遍； ●甲醛蒸：方法是每立方米空间用2ml甲醛（福尔马林）加0.2克高锰酸钾的比例，蒸房