醋酸纤维膜电泳1.pptVIP

醋酸纤维薄膜电泳实验操作指南 企 业 资 质 ISO9001:2000国际质量管理体系认证 《北京高新技术企业》 《制造计量器具许可证》 《医疗器械生产企业许可证》 《医疗器械产品注册证》 《质量、信誉双保障师范单位》 材料和试剂 染色液： 丽春红S（猩红）：1.6g 三氯醋酸： 12.0g 蒸馏水： 200ml 漂洗液：(分三盒装) 95%乙醇： 450ml 冰醋酸： 50ml 蒸馏水： 500ml 醋酸纤维膜的取用（1） 用干净镊子从封口袋中夹出醋酸纤维硬膜，待硬膜露出2/3时进入下一步。 醋酸纤维膜的取用（2） 镊子转为夹取膜的短边，将膜取出。转入下一步。 醋酸纤维膜的浸润（1） 将膜的光面向下，使膜浮在缓冲液面上。 注意：不要将膜直接插入缓冲液面下。 醋酸纤维膜的浸润（2） 缓冲液就会自膜的边缘逐渐渗透。 醋酸纤维膜的浸润（3） 直至膜全部均匀润湿。 醋酸纤维膜的裁剪（1） 用干净镊子取出全部均匀润湿的膜，用干净剪刀在暗面的“左上方”剪角。 （这样便于在后续的操作中确定膜的反正面。） 醋酸纤维膜的裁剪（2） 如果只做一个样品，可以从膜上剪取一条。 醋酸纤维膜的加样（1） 用吸水纸吸干膜表面的缓冲液。 （加样处若不吸干的话，样品会随膜表面的缓冲液不定向漂移，造成实验结果不理想） 醋酸纤维膜的加样（2） 吸干表面的缓冲液时，若发现膜内出现干燥时（部分区域变白），应将膜放回缓冲液中润湿均匀后再吸干表面的缓冲液。 醋酸纤维膜的加样（3） 用铅笔在暗面距离上方1cm左右轻轻划线，根据上样量决定划线长度。 （一般是1.5cm，宽度不超过4mm） 醋酸纤维膜的加样（4） 将样品用微量移液器点在封口膜或塑料膜的表面形成液滴。 醋酸纤维膜的加样（5） 用宽度为1cm、厚度为1-1.5mm，具有一定长度的玻璃片作为点样工具，用其平整的边缘蘸取样品。 醋酸纤维膜的加样（6） 一手用干净镊子按住膜片，另一只手拿着蘸取样品的玻璃片“印盖”在加样线上。 醋酸纤维膜的加样（7） 可以调节膜片的角度使样品均匀分布于样品线内。 醋酸纤维膜的电泳（1） 将加好样的膜片架在电泳槽的调节杆上，加样端靠近负极。 醋酸纤维膜的电泳（2） 在膜片的两端加盖双层纱布，去除纱布间的气泡，使正、负极缓冲液可通过膜片得以连接。 醋酸纤维膜的电泳（3） 以恒定电流进行电泳。 中压电泳仪 电流大小按所有膜的宽度之和进行计算：常用0.5毫安/厘米。 醋酸纤维膜的电泳（4） 左图是一张9(1.5×6)厘米宽的膜被分成6条膜片。 所以恒定电流应设为：5mA 或4mA (9?0.5=4.5mA) 醋酸纤维膜的电泳（5） 样品中加入0.05%(g/ml)溴酚蓝，便于在电泳过程中判断样品泳动状况。 醋酸纤维膜的染色、脱色 醋酸纤维膜电泳结果 故障分析（1） 在浸泡膜的时候由于缓冲液直接到达了暗面的内部，致使越过的地方不易润湿。 解决办法：以膜的光面向下，使膜浮在液面上。 故障分析（2） 加样时膜片已经干燥，上样后，在纱布导引的缓冲液不均匀受力造成。 解决办法：加样时若膜片已经干燥，请重新润湿均匀。 故障分析（3） 加样处若不吸干膜表面的缓冲液，样品会不定向漂移，造成实验结果不理想。 解决办法：用吸水纸吸干膜表面的缓冲液。. 故障分析（4） 加样处若不吸干膜表面的缓冲液，样品会不定向漂移，造成实验结果不理想。 解决办法：用吸水纸吸干膜表面的缓冲液。 故障分析（5） 右侧的膜电泳时间较短 右侧的膜左数2、4泳道由于不溶颗粒物的影响而“拖尾”。可通过上样前对样品进行瞬时离心得以解决。 故障分析（6） 在膜上用铅笔勾划样品线时，若划破膜，就会形成图中右下角膜上的锯齿状条带。 解决办法：笔尖要光滑，用力要均匀适中。 26 27 * * 北京君意东方电泳设备有限公司 Beijing JUNYI-DONGFANG Electrophoresis Equipment CO.,LTD 网址实名：君意东方 TM JUNYI …… 点 击 进 入 〉〉〉 退出请按 ESC Credentials 凭借国内一流和领先的技术与雄厚的实力，敢于在国内率先提出“电泳仪保修三年”的服务承诺。电泳仪以极其优异稳定的性能赢得很多客户的高度好评，凭借电泳仪的高度稳定性才能确保“君意”电泳槽每一次实验都能获得精确而清晰的电泳实验效果。? 凭借国内一流和领先的技术与雄厚的实力，敢于在国内率先提出“免费试用，满意后购买”的为新顾客解除购买顾虑保障消费者利益“的服务措施。? 经试用后，越来越多的老师，科研人员对“