培训3-植物基因工程技术及应用.pptVIP

二、植物基因工程技术及应用 1.植物基因工程技术 先将特定的目的基因分离，然后利用载体、媒体或其它的物理、化学方法将分离的目的基因导入植物细胞受体，并整合到植物受体细胞的染色体(基因的载体)上，从而获得目的基因在植物受体中的表达，最终达到改变植物性状（如抗并抗虫、抗逆等）以及快速培育植物新品种的目的。 2. 转基因植物 是拥有来自其他物种基因的植物。指通过重组DNA技术人工插入其他物种基因以创造出拥有新特性的植物。 2008年中国转基因作物种植面积为世界第六位，作物品种包括棉花、番茄、杨树、牵牛花、抗病毒木瓜和甜椒  （一）转基因植物发展进程与规模 1983年，首批转基因作物（烟草、马铃薯）问世。 1986年，首批转基因作物（抗虫、抗除草剂）进入田间实验，美国和法国同时对抗除草剂转基因烟草进行了田间试验 1992年，中国首先在大田种植转基因抗病毒烟草，揭开了全球转基因作物商业化的序幕。 1994年，美国转基因作物产品（耐储存番茄Flavor Savor ）进入市场。 1994年，商品化种植抗黄瓜花叶病毒（CMV）和抗烟草花叶病毒（TMV）双价的转基因烟草 1996年后，转基因作物的产业化得到迅速发展。 同时带有八种基因代码的转基因玉米将于2010年在美国问世。  1998年，全世界共有 7000万英亩大田种植转基因作物。 1999年又增至 9860万英亩，年增长率超过 40%。 2000年年增长率突降至 10.8%，其中美国的降幅最大。 商业化种植转基因作物的国家数 美国是转基因食品的发源地,也是当今世界转基因食品生产和出口最多的国家。1983年,全球第一个转基因农作物———马铃薯就诞生在美国。据估计,目前美国的零售食品中有60%以上含有转基因成分,90%以上的大豆、50%以上的玉米、小麦是转基因的。 采用现代生物技术手段，培育出一批优质、专用、高产、多抗农作物新品种。转基因技术与产业化快速发展，我国已成为世界第五大转基因植物种植国家，2006年，我国棉花种植面积8095万亩，其中生物技术棉花种植面积已超过总面积的75%，河北、山东、河南、安徽等棉花主产省的国产生物技术棉花种植率已达到100%，棉花单产达到80千克/亩的历史高水平，增幅为6.3%-7.0%，棉花总产量达650万吨，创历史新高，且棉花品质普遍看好。通过数字农业技术的应用，大幅度提高了示范区农业信息化和现代化管理水平，加速了利用高新技术改造传统农业的步伐。 （二）转基因技术 1. 提取DNA （1）获得目的基因方法 ①从生物基因组群体中分离目的基因 采用限制性内切酶切割 ②化学合成目的基因DNA片段 采用DNA合成仪 ③PCR(聚合酶链式反应) 合成DNA 常用的方法 PCR过程示意图 ④mRNA差异显示法获得目的基因 基因在细胞中的特异表达与否，决定了生命历程中细胞的发育和分化、细胞周期的调节、细胞衰老和死亡等。用于分离特异表达的基因。 ⑤用机械的方法 如超声波把基因组打成片段。 PCR反应混合液 ③特异片段的回收、连接与转化 将扩增产物用1%琼脂糖凝胶（EB染色）在100V电压的电泳液中电泳40min ④克隆的筛选与鉴定 蓝白斑筛选 重组子的PCR鉴定 质粒的提取及质粒的酶切鉴定 3. 构建植物表达载体 能独立复制并稳定传代:复制起始点ori或自主复制序列ARS和着丝粒, 端粒 方便插入外源片段: 酶切位点 选择标记: 药物抗性 报告基因: 插入筛选标记 易分离提取 高产率（多拷贝） 强启动子 多宿主 4. 高等植物基因的转化与植株再生 （1）转化方式 根据所用载体类型以及转化对象不同一般有以下主要转化方式: （1） 基因枪转化 （ 2） 电转化 （3 ）融合法 （4 ）花粉管转化 （ 5 ）农杆菌介导 （2）农杆菌介导外源基因转移技术的一般操作 ①将表面消毒的叶片切成小块 ②小块在过夜培养并稀释到一定浓度的含外源基因的根癌农杆菌液中共培养几分钟，使让根癌农杆菌感染叶片切块的伤口。 ③从菌液中捞出小叶块，培养基中培养2天。 ④在含头孢霉素选择培养基中筛选转化细胞。继续培养，转化的细胞分化出芽。 ⑤将芽转入含有抗生素的生根培养基上，诱导生根。 ⑥将完整的转基因植株移栽到土壤中。 分子鉴定 : PCR Southern blot Northern blot W