牛型布氏杆菌铁离子转运蛋白的克隆鉴定及其生物学特性的研究.pdfVIP

734蟋》2010年学术年会 T060050 牛型布氏杆菌铁离子转运蛋白的 克隆鉴定及其生物学特性研究 孙晓庆韩先干童永亮何亮 丁铲胡青海丁家波于圣青 (中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241) 引言／目的 在世界范围内广泛流行并严重危害着人畜健康。布氏杆菌在宿主体内生存能力极强，主要在巨噬细胞内 具有极强的繁殖能力以及防止杀伤的自我保护能力，但其不具有经典的毒力因子且不能引起强烈的先天 性免疫，因而给布氏杆菌的防治带来了很大的困难。本研究通过对sfua免疫原性及相关生物学活性的研 究，为进一步研究尽厅融在牛型布氏杆菌感染、诊断及亚单位疫苗的研制等方面的作用提供基础。 材料方法 TF中，构建重组表达质 通过PCR扩增BfuA得到约为1000bp片段，将BfuA全长克隆至表达载体pCold 粒pCold Blot，膜 定位分析，纤连蛋白结合活性及纤连蛋白溶酶原结合活性等实验进一步阐述其生物学特性。 结果 Ferric 本实验克隆鉴定了牛型布氏杆菌铁离子转运蛋白基因BfuA(BruceUauptake，Bfua)，DNA 序列分析表明该基因编码产物与放线杆菌铁吸收相关蛋白AfuA，粘质沙雷菌SfuA蛋白，流感血友病 HitA蛋白等均具有高度的同源性。WesternBlot检测结果表明，His．BfuA能与布氏杆菌阳性牛血清发生 及纤连蛋白溶酶原结合活性实验结果表明，His—BfuA不具有上述2种活性。 讨论 流 对SfuA的基因序列分析表明，该基因编码产物与胸膜肺炎放线杆菌铁离子吸收相关蛋白AfuA， 感血友病HitA蛋白等均具有高度的同源性；相关文献报道认为胸膜肺炎放线杆菌其AfuA可能是一种周 质转铁蛋白，参与体内铁离子的转运，但其具体机制仍不清楚；提示本研究中的BfuA可能也与布鲁氏菌 体内对铁的吸收，摄取，利用的相关过程有关。 具有良好的免疫原性并确实表达于布氏杆菌的感染过程中，为进一步研究最厅诅的功能和基于助诅开发布 氏杆菌的诊断抗原和亚单位疫苗奠定了良好的基础。FL和PL结果表明该蛋白不具备与纤连蛋白和纤连 蛋白溶酶原结合活性，但这并不能说明其不参与布氏杆菌感染的黏附和入侵过程，可能是通过与诸如弹 性蛋白、蛋白聚糖类等物质的结合参与黏附和入侵，或者该蛋白表达于布氏杆菌感染的其他阶段，这有 待于后续实验的进一步验证。膜定位分析表明BfuA为膜蛋白，膜蛋白不仅维持布氏杆菌细胞的正常结构 和基本功能，还涉及侵袭、胞内迁移和复制等多个胞内生存相关的环节，提示Bfua可能在布氏杆菌感染 中发挥重要作用。