人IFN-β基因启动子荧光表达载体的构建及鉴定.pdf

588 细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2014，30(6 · 论著 · 文章编号：1007—8738(2014)06—0588—04 人 IFN-13基因启动子荧光表达载体的构建及鉴定 徐永妮 ，曹梦远 ，惠倩倩 ，叶 伟 ，于 澜 ，张 亮 ，张芳琳 (第四军医大学微生物学教研室，陕西 西安710032；解放军第323医院检验科，陕西 西安 710054) [摘 要] 目的 构建人 IFN—p基因启动子萤火虫荧光素酶报告基因载体 (pGL3-IFNB1)及增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达载 体 (pGE3-IFNB1)，并在 A549细胞中进行表达验证。方法 采用 PCR方法扩增 出IFN—B启动子区片段，克隆入荧光表达载体 pGL3basic和pGE3basic，并用脂质体瞬时转染A549细胞 ，6h后用汉滩病毒(HTNV)感染转染后的细胞，24h后检测重组载体 在细胞内的表达情况。结果 重组载体 pGL3一IFNB1和 pGE3-IFNB1分别经双酶切鉴定及序列测定证实载体构建正确；且在 A549细胞内成功表达。经 HTNV刺激后表达 明显增加。结论 成功构建 了人 IFN—B启动子荧光素酶报告基 因载体 (pGI．3-IFNB1)及增强型绿色荧光蛋白表达载体 (pGE3-IFNB1)，为进一步研究病毒诱导产生IFN．B机制提供了有用的工具。 [关键词]IFN-8；启动子；表达载体；汉滩病毒 ；病毒感染 [中图分类号]Q786，R392．11 [文献标志码]A Construction and identification of luciferase and EGFP expression vectors containinghumanIFN-I3lpromoter xuYongni一，CAOMengyuan，HUIQianqian，YEWei，YULan，ZHANGLiang，ZHANGFanglin DepartmentofMicrobiology，FourthMilitaryMedicalUmvemi~，Xi’an710032；Laboratory，No．323HospitalofPLA，Xi’na 710054，China IAbstractI objecfive ToconstructaIuciferaseexpressionveotor(pGL3-IFNB1)andanenhancedgreenfluorescent proteinexpressionvector(pGE3-IFNB1)containinghumanIFN-ppromoter，andverifythepromoteractivityofIFN-BinA549 cells．Methods IFN-BpromoterwasamplifiedwiththehumangenomeDNAbyPCR，thenthesegmentwasclonedintothe eukaryoticexpressionvectorspGl_3-basicandpGE3-basicbyPCR．TheeukaryoticexpressionvectorswerenamedpGl_3一 IFNB1andpGE3-IFNBI。respectively．TherecombinantvectorswerethentransientlytransfectedintoA549cellsrespectively． and6hourslater，thetransfectedcellswereinfectedwithHantaanvirus(HTNV)．After24hours。theexpressionsofpG1_3． 1FNB1andpGE3一IFNB1were tested inA549 cells．Results Double restriction enzyme digestion and sequenceanalysis showed thatthe recombinantvectorswere successfully constructedand expressed inA549 cells correctly．AfterHTNV infection．strongerexpressionwasobservedInthesecells．Conclusion The recombi