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第 卷 第 期 病 毒 学 报
l6 4 VO1 . l6 NO . 4
2 0 0 0 年 l 2 月 CHI NESE J0URNAL 0F VIR0L0GY Dec . 2 0 0 0
鸡痘病毒载体启动子的优化
朱爱华,彭大新,刘秀梵,张如宽
(扬州大学 农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏 扬州, )
225009
摘要:要提高外源基因在鸡痘病毒( )载体的表达量,必须使用强启动子来控制表达。为构建较强的启动子组
FPV
合,根据痘苗病毒天然启动子 的结构,人工合成 条寡核苷酸,形成一个早期启动子和一个晚期启动子,其首
P7 . 5 4
尾可相互连接。利用分子生物学常用实验方法把合成的启动子进行不同组合,最终形成 l0 个较有代表性的启动
子组合 。在其下游插入大肠杆菌 半乳糖苷酶基因 ,并进一步构建成鸡痘病毒转移载体
PSl ~ l0 - LacZ pFBSl ~
!
l0 ,同时以P7 . 5 作对照构建成pFB7 . 5 。以脂质体介导转染鸡痘病毒中国疫苗株282E4 感染31 ~ 41 后的原代鸡
胚成纤维细胞( )单层。用蓝斑筛选法纯化病毒 次,最终得到稳定的重组病毒。将纯化的重组病毒感染次代
CEF 4
,分别于感染后 、 、 、 、 收获细胞,制备提取物,检测提取物中 半乳糖苷酶的活性。通过计算
CEF l01 241 361 481 721 -
!
比较,筛选出其中较强的启动子组合 ,其表达活性约为 的 倍,为进一步构建高效表达的鸡痘病毒通
LLEE P7 . 5 3 . 5
用载体打下了良好的基础。
关键词:人工合成;强启动子;半乳糖苷酶的活性;鸡痘病毒
-
!
中图分类号: 文献标识码: 文章编号: ( )
O782 A l000 - 872 l 2000 04 - 0347 - 05
[]
2
近年来,随着对鸡痘病毒( , ) 由本室彭大新等 构建。克隆载体pUCl8、含 LacZ 基因的
fOw1pOX ViruS FPV
生物学特性的深入研究,人们对建立重组FPV 疫苗 质粒pSV- -ga1 购自华美
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