优化海兔肝蛋白质组提取和分离技术.pdfVIP

维普资讯 第45卷 增刊 厦 门大学学报 (自然科学版) Vo1．45 Sup 2006年 5月 JournalofXiamenUniversity (NaturalScience) M ay 2006 优化海兔肝蛋白质组提取与分离技术 李志丹，包晓东，黄慧英，黄河清 (厦门大学生命科学学院 生物化学与生物技术学系，福建 厦门361005) 摘要：为了提高海兔肝脏蛋白质组的提取及研究效率，本文描述和比较了3种提取海兔肝脏蛋白质组的方法：裂解液浸 泡 一超速离心，丙酮一TCA沉淀一裂解液浸泡，裂解液浸泡一丙酮一TCA一裂解液溶解．然后采用常规 SDS双向 电泳对提取出的蛋白质进行检验 ，用Melanie4Trial软件分析电泳图谱，通过对蛋白质：兮辨率和斑点总数的比较，选出一 种更适合海兔肝蛋白质的提取方法．结果表明采用丙酮一TCA沉淀一裂解液浸泡法提取海兔肝蛋白质所得的双向电泳 图谱不论从蛋白质斑点分辨率还是总数上都优于其他两种方法．．更适合提取分离海兔肝脏蛋白质． 关键词 ：海兔肝；SDS—PAGE双向电泳；提取与分离；优化分离；蛋白质组 中图分类号：Q51 文献标识码：A 文章编号：0438-0479(2o06)S-0194-04 海兔 (Aplysia)系杂食性动物，属软体动物门腹足 1．1 材料与试剂 纲(Gastropoda)后腮亚纲 (Opisho—branchia)海兔科 NLCS取材于厦门浅海区域．分离海兔肝蛋白质 (Aplysiidae)动物，广泛分布在热带及亚热带海域，以 组所需要的试剂和配方参考常规的SDS—PAGE双向 底栖矽藻和沉积在海滩上的有机质、绿藻和底栖桡足 电泳技术-2．3J，但进行适当优化． 类等为食．海兔系雌雄同体的海洋软体动物，它在我国 丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、三羟 甲基氨基 甲烷 福建、广东、山东等省的海域均有分布．厦门最常见的 ("Iris)、二硫苏糖醇 (DTT)、超纯尿素 (urea)、NON— 海兔品种是蓝斑背肛海兔 (Notarchusleachiicirrosus IDETP-40(NP40)、CHAPS均购自上海生工；载体两 Stimpson，NLCS)．现在海兔已经成为生物研究的一种 性电介质(pH3—9，pH5—8，pH4—6)购 自北京军事 模式生物，尤其是在神经节蛋白质组的研究上．经国内 医学科学院；胰蛋白酶 (V5111)购 自Promega公司； 外各大数据库检索后，发现有关海兔肝的蛋白质组学 SDS分子量标准购 自Fermentas公司；Ot一氰4-羟肉桂 研究尚未见详细报道．由于海兔肝脏中蛋白质种类相 酸(HCCA)购 自美国ICN生物医学公司． 对较少，更适合开展肝脏蛋白质组学研究．本次实验以 1．2 分离蛋白质组的基本仪器设备 建立海兔蛋白质组学数据库为 目标，对海兔肝的蛋白 双向电泳槽：DYCZ-26型多用途电泳槽，北京六 质组学进行系列研究．近期，基质辅助激光解吸离子化 一 仪器厂；垂直电泳槽 ：DYCZ-24型，DYCZ-24A型， 飞行 时 间 (Matrix—assistedlaserdeposition／ionization