昆虫脂肪体细胞体外增殖方法及同源病毒敏感脂肪体细胞系建立研究.pdfVIP

摘要 摘要 昆虫细胞系具有非常广泛而重要的科学和应用价值．本研究参考动物细胞培养中植 块培养的方法，从昆虫幼虫脂肪体细胞的原代培养入手，系统研究了以昆虫脂肪体组织 为实验材料建立昆虫细胞系的方法，并初步探讨了昆虫纲胞在体外增殖的机制，试图为 更多昆虫脂肪体细胞系的建立提供有效的技术手段．研究中选用健康的光肩星天牛 (Anoplophora 龄、不同取材部位的大小和完整性、不同培养表面、不同培养液种类和pH、不同血液 中酚氧化酶原抑制物的种类和添加比例、原代培养物的贴壁处理等因素对原代培养结果 的影响，以及传代方式、条件、时机等对传代培养结果的影响，试图探索出一套特有的 昆虫脂肪体细胞建系方法．实验结果表明，由脂肪体组织建立昆虫细胞系，最佳的取材 为末龄或进入预蛹期幼虫体内完整的脂肪体组织，优先使用一次性塑料培养瓶，原代细 pH6．2-6．8。决定昆虫脂肪体细胞是否成系的关键因素包括：原代培养的组织能否同培养 器皿表面紧密接触(贴壁)，紧密贴壁的组织块倾向于游离出分裂能力较强的细胞群； 在新生细胞长满瓶底时，处理好第一次或前几次转瓶、传代的步骤非常重要。最佳的初 次传代方式是轻轻摇晃，将较易脱壁的细胞以较高的密度传入新的培养瓶中，同时注意 不要扰动原组织块，减小对细胞的剪切力．原代