TGF-β1、β3及其受体βRⅠ、βRⅡ+mRNA及蛋白在子宫肌瘤组织中表达.pdf

中文摘要 mRNA TGF—B1、B3及其受体BRI、BRII 及蛋白在子宫肌瘤组织中的表达 摘 要 目的：(子宫肌瘤是最为常见的妇科良性肿瘤。目前研 究认为人体内卵巢雌孕激素通过局部的生长因子以自分泌 或旁分泌的形式调节肌瘤细胞的生长和分化。TGF-Bs就是 其中一种备受关注的细胞生长因子。TGF_Bs在哺乳动物中 存在三种形式：TGF-BI、B2、B3及三种受体I、II、III 型。已有报道人体组织纤维化、免疫抑制、肿瘤发生以及 其它功能失调均与TGF_Bl、B3行为异常有关牌研究目的 是试图通过免疫组化、原位杂交两种方法，分别从基因和 ⅡI在子宫肌瘤信号传导过程中不起主要作用，)在子宫肌瘤 及邻近健康肌层中的表达，初步探讨TGF-BI、TGF-B3及其 受体与子宫肌瘤发生发展的关系，了解子宫肌瘪的发病机 制。 厂 (方法：子宫肌瘤患者30例，以往月经规则，近3个月 无类匿醇激素使用史，肝、肾功能正常。年龄33—54岁， 平均46．5岁，卵泡期20例，黄体期10例。行子宫切除术， 手术切除的肌瘤(包括瘤心和瘤体边缘)及正常肌组织4％ 多聚甲醛及时固定。常规脱水、透明、包埋，进行蜡块制 备。所制成的标本分别进行He染色进行组织形态观察；原 位杂交及免疫组化染色。(1)原位杂交染色步骤：①蜡块7 pIB连续切片，脱蜡至水后，3％双氧水／甲醇溶液室温浸泡 中文摘要 7分钟，灭活内源性过氧化物酶。②以胃蛋白酶，37℃，消 化30分钟，暴露mRNA核酸片段。③进行预杂交(预杂交 液中不含探针)，湿盒中37℃4小时。④杂交——TGF—B1、 B3探针采用多相寡核苷酸探针，以地高辛3l尾段随机引 物标记方法进行标记。杂交后，将原位杂交专用盖玻片盖 在切片上，恒温箱40—42℃过夜。⑤杂交后的洗涤：揭掉盖 玻片，30一37℃左右水温的2xSSC洗涤5分钟×2次；0．5xSSC 洗涤15分钟X1次；0．2xSSC洗涤15分钟×2。⑥滴加封闭 液：37℃30分钟。⑦滴加生物素化鼠抗地高辛：20℃左右 120分钟。⑧滴加SABC：20℃左右30分钟。滴加生物素化 过氧化物酶：20℃左右30分钟。@DAB显色，苏木素轻度 复染，封片后显微镜下观察。(2)免疫组织化学检测实验方 法是应用SABC方法检测子宫肌瘤瘤边、瘤心和健康肌组织 中TGF-B1、B3、6RI、BRII的表达及分布情况。具体步骤 如下：①石蜡切片脱蜡至水后，3％双氧水孵育7分钟，灭 活内源性过氧化物酶。②TGF_Bl、B3采用微波修复抗原； TGF-BRI、BRII采用酶消化处理：滴加复合消化液10分钟。 ③滴加抗原修复液I(用于微波修复后)，室温10分钟。④ 正常山羊血清封闭，37℃孵育30分钟。⑤滴加一抗4C冰 箱过夜。⑥滴加生物素化山羊抗兔二抗，37C孵育30分钟。 ⑦SABC，37℃孵育30分钟。@DAB显色，苏木素轻度复染， 封片后镜下观察。 结果：(1)子宫肌瘤病理学改变子宫肌瘤细胞形态与子 宫肌形态类似，但细胞排列更为密集，可见有丝分裂相。 细胞基质成分增多，片状粉红色玻璃样变区域尤以瘤体中 心为重。(2)原位杂交检测结果子宫肌瘤组织中TGF-B1、 中文摘要 TGF-B3 mRNA杂交信号检测结果显著强于邻近健康肌层(P 另外，二者水平明显受月经周期的影响，黄体期较卵泡期 显著增高(P0．01)。TGF-BI、TG卜B3 mRNA二者水平在子宫 肌层无显著差异，月经周期对其无影响。TGF-BI、TGF-B3 mRNA在子宫肌瘤中的表达强弱与肌瘤大小无关(P0．05)， 而与肌瘤不同位置关系密切。肌瘤体积越大，越靠近瘤体 边缘假包膜处，TGF-BI、TG卜B3mRNA增高更为显著(P 0．01)。(3)免疫组化检测结果免疫组化有关TGF-BI、 TGF-B3蛋白的检测结果与其mRNA检测结果基本一致。 TGF-BI、TGF-I]3蛋白的表达显著高于邻近健康肌层(P O．01)，黄体期高于卵泡期(P0．01)，TGF-B3增高更为 明显(P0．05)。与肌瘤大小无关(PO．0