使用差示量热仪测定抗冻蛋白热滞活性方法的研究.pdfVIP

生物物理学报 第二十四卷 第六期 二OO八年+--fl ACTABIoPHYSICASINICAVoI．24No．6 Dec．2008 使用差示扫描量热仪测定抗冻蛋白热滞活性方法的研究 张超1,2， 赵晓燕I， 马越·， 张晖2， 姚惠源2 (1．北京市农林科学院蔬菜研究中心，北京100097； 2．江南大学食品科学与工程国家重点实验室，无锡214122) 摘要：抗冻蛋白因具有独特的抗冻活性而被研究者广泛关注．但是，目前抗冻活性的检测没有一个标准的， 统一的检测方法，这严重制约了该方面的研究进展．作者详细研究了采用差示扫描量热仪测定样品热滞活性的方 法，并对该方法的稳定性，专一性和精密度进行评价。结果显示，采用差示扫描量热仪测定样品的热滞活性具有 较高的稳定性、重复性和精密度．因此，差示扫描量热仪法可以作为一种通用的方法进行抗冻蛋白热滞活性的 检测。 关键词：抗冻蛋白；热滞活性；热分析；差示扫描量热仪 中图分类号：Q33 0 引 言 而其它文献报道的THA各不相同，Zhang等【8】使用 抗冻蛋白(antifreeze protein，AFP)具有非 依数性降低体系冰点的作用，因此可以通过测定其 热滞活性(thermalhysteresisactivity，THA)来反 浓度为1mg／mL)，未详细介绍其它相关测定参数。 映AFP的抗冻活性。目前，THA检测方法主要有 因此，深入研究测定方法和测定程序对样品THA 三种：显微镜观察法、微量渗透压计法和差示扫描 的影响，并建立一个有效测定AFP热滞活性的标 量热仪(differentialscanningcalorimetry，DSC) 法【旧。显微镜观察法是用肉眼进行观察，主观性 准方法是十分必要的。 强，很难确定统一的标准，即使同一个人测定，也 目前，已经有不少研究者使用DSC法测定 会存在较大误差刚。微量渗透压计法是根据体系结 晶前后的渗透压变化，通过经验公式来计算THA， 研究。本文以DcAFP为研究对象，使用DSC法测 它受体系溶液种类、浓度、冷台温度程序等影响， 定THA，对影响样品THA的因素进行全面考察， 是目前较常用的一种测定方法。在相同的测定环境 以建立一个有效测定THA的标准方法。其中，主 中，微量渗透压计法测定结果的精确度和重复性都 要研究样品浓度、升降温速率、冰晶含量等因素对 较高，缺点在于无法精确控制和测定体系的冰晶含 样品THA的影响，并考察了该方法的稳定性、重 量，不利于进一步揭示结晶过程中体系发生的变 复性和精确度。 化M。DSC法主要通过测定体系结晶过程中吸热 和放热的变化，检测体系发生的物理变化，确定真 1材料与方法 实的结晶起始温度，进而获得THA，测定结果更 加准确客观，而且DSC法可以精确测定体系的冰 1．1 DeAFP的纯化 晶含量[71，缺点在于检测花费的时间较长，需要高 3】的方法从红萝卜非原质体中纯 参照Meyer等【1 精度的设备。 化DcAFP。 由于没有统一的、权威的THA测定方法，目 前使用不同的检测方法或不同的检测程序测定的 收稿日期：2008-05．20 基金项目：国家十五攻关项目(2001BA501A03)资助 THA结果各不相同，无法进行横向比较。比如， 通讯