清络通痹颗粒对RA患者成纤维样滑膜细胞增殖及其RANKL表达的影响.pdfVIP

中华中医药学会风湿病分会2010年学术会论文集一实验研究 ·109· … --———— 清络通痹颗粒对RA患者成纤维样滑膜细胞增殖 及RANKL表达的影响 南京中医药大学(210029) 周学平黄艳壬明艳周玲玲杨研华 比色法检测舍药血清对nS增殖的影响，RT-PCR检测舍药血清对FLS 药血清作用72小时。RA 剂量舍筠血清可抑制RA患者FLS的异常增殖，并下调RANKL的表达。这可能是清络通痹颗粒治疗RA的重要机刳之一。 主题词清络通痹颗粒／药效学滑膜细胞增殖／药物作用RANKL表达／药物作用实验研究动物大鼠 类风湿关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是一种tin上下游引物，RT-PCR试剂盒(PromegeCorporation 以关节和关节周围组织的非感染性炎症为主的全身 Madison)，Trizol试剂(Invitrogen公司) SCⅢN’nF- 性自身免疫性疾病，其病理特点为关节滑膜的慢性炎 1．3仪器311l型C02培养箱(FORMA 症增生，细胞浸润，血管翳形成，软骨及骨组织侵袭， 导致关节结构的破坏。其中非常重要的特征是成纤维 样滑膜细胞(fibroblast-likesynoviocytes，FL$)过度增型电泳仪(北京君意东方电泳设备有限公司)。PTC- Research 生。这种FL$的增殖具有“肿瘤样”特性…。并发现 100型PCR仪(MJ Inc公司)，紫外投射分 在RA滑膜组织中．核因子KB受体活化子配体析仪(北京沃德生物医学仪公司)，超静工作台(苏州 Reader550型酶联免疫 (RANKL)的异常表达参与骨破坏进程。BANKL是净化设备有限公司)，Micropat 破骨前体细胞分化为破骨细胞过程中必要的细胞因 检测仪(日本，Bio—Rad公司) 子，其异常表达对关节周围的骨吸收起关键性作 2方法 用【2J。为此，本实验拟观察中药新制剂清络通痹颗 2．1含药血清的制备健康家兔lO只，随机分5 组，每组2只，即①正常对照组；②阳性对照组：TⅡ7． 粒(QinghotongbiGranule，QLT)含药血清对体外培养 5 FL$增殖及RANKL表达的影响，以探讨QLT治疗类 风湿关节炎的作用机制。 l材料 1．1病例来源2008年江苏省中医院行膝关节置天，正常对照组给予等体积生理盐水。末次给药后 换术的RA患者。所有病例皆符合1987年美国风湿lh，各组家兔颈总动脉放血，离心取血清。56℃30rain 病协会(ACR)修订的类风湿关节炎诊断标准。 灭活，0．221．un微孔滤器过滤除菌，分装，一20℃保存 1．2药物与试剂清络通痹颗粒(由生地、清风藤、 备用。 川断、露蜂房、鬼箭羽等组成)含生药3g·ml～，临用 2．2滑膜细胞原代培养术中取下的滑膜组织块带 前用蒸馏水配成所需浓度，由南京中医药大学植物药 人准备好的超净工作台内，剔除表面血污及附着的脂 深加工工程中心提供，雷公藤多苷片(TⅡ)：浙江得 肪组织。剪下滑膜组织PBS清洗3次，将组织剪成 lmrn×lhim×l 恩德制药有限公司，DMEM培养粉(美国Gibco公 l砌小块，置于无菌细胞瓶中，向剪碎 司)，二甲亚砜(美国Sigma公司)，胎牛血清(杭州四的组织中加入少许FBS。能保持组织块湿润即可。盖