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125I粒子抑制乳腺癌细胞bFGF表达的实验研究.doc
125I粒子抑制乳腺癌细胞bFGF表达的实验研究
作者:张万福 王明春 罗开元 李波 杨嵘 章治平 李晓刚 褚焱 作者单位:昆明医学院第四附属医院 普外科 (云南 昆明 650021)
【摘要】 目的:探讨125I粒子对乳腺癌细胞中碱性成纤维细胞因子(bFGF)表达的影响及其在抑制肿瘤细胞增殖方面的作用机制。方法:建立人乳腺癌细胞株MCF-7裸鼠皮下移植瘤模型,根据处死时间,随机分为8组,包括D7、D14、D21、D28组(对照组)及S7、S14、S21、S28组(实验组),每组6只,对照组植入空白粒子(0 mCi),实验组植入125I粒子(0.4 mCi)。观察粒子植入后瘤体生长情况,粒子植入后第7、14、21、28天分别处死各组荷瘤小鼠。半定量RT-PCR、免疫组织化学染色方法检测bFGF mRNA及其蛋白的表达。结果:植入125I粒子后,实验组肿瘤生长缓慢,肿瘤抑制率为53.27%。粒子植入第28天,与对照组相比,实验组肿瘤组织的bFGF mRNA及蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(Χ2=45.788,P0.01)。结论:125I粒子抑制bFGF mRNA和蛋白的表达是其治疗乳腺癌增殖的分子生物学机制之一。
【关键词】 碘·乳腺肿瘤·成纤维细胞生长因子2·小鼠,裸
【ABSTRACT】 Objective: To investigate the mechanism of 125I refraining the growth of tumors cell by hindering the expression of basic firoblast growth factor(bFGF) in breast cancer. Methods: The animal models of the breast cancer cell(MCF-7) were established by subcutaneously injecting the tumor cells into nude mice. The mice were divided into eight groups randomly and there 乳腺癌严重威胁女性的身心健康,近年来随着诊断技术水平不断提高,越来越多早期乳腺癌被发现,保留乳房手术也逐渐增多,乳腺癌局部切除结合125I粒子组织间植入放疗是保乳手术重要的方法之一。但目前125I粒子影响乳腺癌发生和转归的分子生物学机制尚不十分清楚,本实验通过构建裸小鼠乳腺癌细胞模型,植入125I粒子,测量肿瘤组织内碱性成纤维细胞因子(basic firoblast growth factor,bFGF)的变化,揭示125I治疗乳腺癌的生物学机制。
1 材料与方法
1.1 材料
实验动物及瘤细胞株,BALB/c-nu/nu裸小鼠雌性48只,乳腺癌细胞株MCF-7,均由中国医学科学院肿瘤研究所提供。空载粒子(0 mCi)和125I粒子(0.4 mCi),由上海欣科医药公司提供,美国食品药品监督管理局注册号为9614503,ISO9001认证编号为40-3842-339113。兔抗人单克隆bFGF抗体、SABC试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。DAB显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。总RNA提取试剂盒购自北京鼎国生物试剂有限公司。逆转录酶购自东洋纺上海生物科技有限公司。Taq酶购自美国Invitrogen公司产品。六碱基随机引物购自美国Promega公司。dNTP购自东洋纺上海生物科技有限公司。引物设计、合成由武汉博士德生物工程有限公司完成。bFGF上游引物:5-TTTACTATGTTTTGACTTCCTG-3,长度:22 Mer,Tm值:55 ℃,相对分子质量:6.647×103。下游引物: 5-CTTCTGTTTATGACTGCTTCTG-3,长度:22 Mer, Tm值:59 ℃,相对分子质量:6.648×103。扩增片断长度为298 bp。参照基因GAPDH(甘油醛3-磷酸脱氢酶),上游引物:5- TTGGTATCGTGGAAGGACTCATG-3,长度:22 Mer,Tm值:67 ℃,相对分子质量:6.593×103。下游引物: 5-GTTGCTGTAGCCAAATTCGTTGT-3,长度:22 Mer,Tm值:67 ℃,相对分子质量:6.593×103。扩增片断长度为475 bp。粒子植入及防护设备由云南省125I粒子植入中心实验室提供。
1.2 荷瘤裸小鼠模型建立、分组、粒子植入
由中国医学科学院肿瘤研究所制作人类乳腺癌细胞MCF-7裸鼠皮下移植瘤模型。根据处死时间,荷瘤小鼠随机分为8组,即对照
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