体外高磷环境下血管平滑肌细胞转分化过程的研究.pdfVIP

-116· ·基础研究· 体外高磷环境下血管平滑肌细胞 转分化过程的研究 王宁宁 王笑云 杨俊伟 邢昌赢 居小兵 孙彬 周书琴 闻萍 熊明霞 【摘要】 目的观察体外高磷培养条件下，血管平滑肌细胞(VSMC)向类似成骨样细胞 转分化的动态变化特点。方法Western印迹和免疫荧光法观察不同磷浓度(1．0、2．5、3．5 mmol／L)培养条件下，人VSMC的标志蛋白Q平滑肌肌动蛋白(d—SMA)以及成骨细胞特异性 的核转录因子Cbfal、相关骨基质蛋白(骨桥蛋白、I型胶原和骨钙素)的动态变化过程。实时 荧光定量PCR法分析上述指标的基因表达水平。在此基础上，以硝酸银染色和茜素红染色了 解细胞的钙盐沉积状况，最后通过电镜观察不同培养条件下细胞超微结构的改变。结果 在无血清的培养条件下，高磷(2．5、3．5mmol／L)刺激细胞12h时，胞内Cbfcd的表达就明显 增加(P0．05)；3d后高磷组(2．5、3．5mmol／L)细胞中I型胶原和骨桥蛋白的含量显著上调 (均P0．05)；第6天骨钙素的产生开始增加；15d时高磷组(2．5、3．5mmollL)n．SMA的含 量才显著下降(P0．05)。实时荧光定量PCR结果显示，高磷环境培养ld时，细胞中骨桥蛋 白、I型胶原的mRNA水平显著升高(均P0．05)；5d时骨钙素的mRNA表达显著增加(P 0．05)；10d时a．SMA的mRNA含量显著减少(P0．05)。在高磷营养液中培养15d时，细胞 出现多处斑片状的钙盐沉积。电镜可见胞质内产生大量胶原纤维和钙化的基质囊泡。结论 高磷可诱导VSMC向类似成骨样细胞转分化，这是一个复杂的、有多个环节、有序的动态变 化过程。 【关键词】 肌细胞，平滑肌； 钙质沉着症； 肌，平滑，血管； 磷 smoothmusclecellstransformationinduced enviroment／npigro Vascular byhigh phosphate WANG Xiao-yun，YANGJun—wei，XING Bin， Ning-ni，lg产，WANG Chang-ying,JUXiao-bing,SUN ZHOU First Affiliated Shu—qin，WENR，弼XIONGMing-xia．*Depm由nent矿Nephrology，the Medical University,N锄j堍210029,China Hospital。Nanjing author：WANG Corresponding Xiao—yun，Email：xywang@1941@126．corn ToobselVe of 【Abstract】 the vascularsmoothmuscle Objective steps cells(VSMCs) calcificationinduced enviromentinvitro． MethodsVSMCswereincubated byhighphosphate ’Iritll mmol／Lor3．5 fordifferent ofcore highphosphate(2．5 mmol／L)mediumtimes．Expression factor d·smooth