凝胶层析检测巨分子促乳素血症及其临床应用.pdfVIP

ofClinical 209 临床检验杂志2008年第26卷第3期ChineseJournal LaboratoryScience，2008，VoL26，No．3 中图分类号：R446．1 文献标识码：A 文章编号：1001-764x(2008)03旬209旬2 ·实验技_7R· 凝胶层析检测巨分子促乳素血症及其临床应用 310058) 摘要：目的建立凝胶层析联合电化学发光法检测巨分子促乳素血症方法。方法通过对层析条件的选择与优化，建立凝胶 层析联合电化学发光法最优条件，评价方法的精密度及准确度，应用此法区别巨分子促乳素血症与真性高促乳素血症。结果 S-200及流速0．75 选用Sephacryl ml／min为分离不同分子大小促乳素的最佳条件，精密度与准确度在临床可接受范围。巨 分子促乳素血症与真性高促素血症患者的促乳素层析谱不同，两者LH、E2浓度有显著性差异。结论凝胶层析法结合电化 学发光法能对巨分子促乳素血症与真性高促乳素血症进行鉴别诊断。 关键词：凝胶层析法；巨分子促乳素血症；高促乳素血症 HZ超声15min待用。 Whittaker等1981年首次报道1例高促乳素血膜抽滤，并用频率100 症(hyperprolactinemia，HP)患者，凝胶层析发现此患1．3蛋白质稳定剂小牛血清清蛋白(BSA)50g、 甘油50IIll溶于lL洗脱缓冲液中。 者血清促乳素(pro|actin，PRL)以特大分子PRL为 1．4检测试剂Roche公司2010型电化学发光仪 主，缺乏闭经、溢乳、不孕等症状。Jackson等首次使 配套试剂。 用巨促乳素血症(macroprolactinemia，MP)一词，以 描述主要由特大分子PRL引起的HP。MP的定义1．5仪器凝胶层析用法玛西亚公司AKTA purifi— 000 为，血液中的PRL分子以分子质量(MW)100 cm 的巨分子PRL为主。Andersen…等证明了巨分子S．200、SephacrylS-300、Superdex75预装柱(60 PRL在体外有生物活性，但由于其本身分子质量巨 ×1．5em)，均购自GE公司。 大而不能通过细胞壁与PRL受体结合，导致体内生 1．6凝胶层析法联合电化学发光法检测MP方法 物活性丧失。因此认为循环中巨PRL分子不具有 1．6．1样品预处理血清自冷冻取出融化后平衡 病理学意义。但巨分子PRL引起的HP会对诊断产至室温，混匀后6 rain取血清中段， 000×g离心10 生混淆并作出不必要的后续治疗旧J。 用0．2斗m的滤膜过滤，吸取血清待用。 凝胶层析法是检测巨分子PRL的较好方法，但 1．6．2组分定标用分子质量150000的人IgG、 影响因素较多，操作较为复杂。本文研究用凝胶层 66000的BSA和21500的大豆胰蛋白酶抑制剂 析法进行样品前处理，再用Roche公司电化学发光(trypsin 法检测，并了解其临床应用可行性。 标体积收集目标组份。 1材料与方法 1．6．3上机分离参数流速0．75ml／min，压力上 1．1 样品来源 高促乳素血症(HP)标本获自限0．30mPa，上样量0．4—0．75ml。洗脱相