POD的测定.docVIP

过氧化物酶（POD）活性的测定 过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶，它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系，在植物生长发育过程中，它的活性不断发生变化，因此测量这种酶，可以反映某一时期植物体内代谢的遍化。 1、原理 在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在 470 nm 处有最大吸收，可用分光光度计测量 470 nm 的吸光度变化测定过氧化物酶活性。 2、实验仪器 研钵、电子天平、冰冻高速离心机、可见光分光光度计、 3、实验试剂 （1）100 mmol／L 磷酸缓冲液 pH6.0 ①0.2mol/L的 NaH2PO4称取NaH2PO4加重蒸水至100ml溶解。②0.2mol/L的Na2HPO4：称取Na2HPO4加重蒸水至100ml溶解。NaH2PO4 87.7ml，Na2HPO412.3ml，混合 （2）反应液 100 mmol／L 磷酸缓冲液（pH6.0）50 mL于烧杯中，加入愈创木酚28μl，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入30%过氧化氢19μl，混合均匀，保存于冰箱中。 （3）20mmol/l的KH2PO4 称取0.272g，定容至100ml 4、实验步骤 （1）酶液的制备 取1.00g植物叶片剪碎，加入预冷的20mM KH2PO4 5ml进行冰浴研磨提取。浆液低温离心4000r/min 15min,上清液为酶粗体液（记录体积），定容至50ml待测定。 （2）酶活性测定 取光程1cm的玻璃比色杯2只，一只加入反应液3ml，20mM KH2PO4 1ml作为调零管。另一只加入反应液3ml，提取的酶液1ml，立即开始计时，在470nm波长处进行比色，开始记录数据，然后每隔一分钟记录一次吸光度值，共测3min。 5、结果计算 以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以 ΔA 470 /[min · g （鲜重） ] 表示之。也可以用每 min 内 A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位（ u ）表示。 △A470 ×VT 过氧化物酶活性(U·g-1·min-1)=────── W×VS×0.01×t 式中：△A470——反应时间内吸光度的变化； W——马铃薯鲜重（g）； t——反应时间（min）； VT——提取酶液总体积（mL）； VS——测定时取用酶液体积（mL）。 本文来自：/zwslx/smkxnews.asp?id=37 植株 吸光度（420nm） △A420 　 0 1min 2min 3min 1——0 2——1 3——2 均值 1 　 　 　 　 　 　 　 　 2 　 　 　 　 　 　 　 　 3 　 　 　 　 　 　 　 　 4 　 　 　 　 　 　 　 　 5 　 　 　 　 　 　 　 　 6 　 　 　 　 　 　 　 　 7 　 　 　 　 　 　 　 　 8 　 　 　 　 　 　 　 　 9 　 　 　 　 　 　 　 　 10 　 　 　 　 　 　 　 　 11 　 　 　 　 　 　 　 　 12 　 　 　 　 　 　 　 　 13 　 　 　 　 　 　 　 　 14 　 　 　 　 　 　 　 　 15 　 　 　 　 　 　 　 　 16 　 　 　 　 　 　 　 　 17 　 　 　 　 　 　 　 　 18 　 　 　 　 　 　 　 　 19 　 　 　 　 　 　 　 　 20 　 　 　 　 　 　 　 　 21 　 　 　 　 　 　 　 　 22 　 　 　 　 　 　 　 　 23 　 　 　 　 　 　 　 　 24 　 　 　 　 　 　 　 　 25 　 　 　 　 　 　 　 　 26 　 　 　 　 　 　 　 　 27 　 　 　 　 　 　 　 　 28 　 　 　 　 　 　 　 　 29 　 　 　 　 　 　 　 　 30