利用正交设计优化小苍兰ISSR-PCR反应体系.pdf

第28卷第4期 植 物 研 究 2008年7月 V01．28No．4 BULLETINOFBOTANICALRESEARCH Jul．，2008 利用正交设计优化小苍兰ISSR．PCR反应体系 周凌瑜 吴晨炜 唐东芹 宋会书 刘群录8 (上海交通大学农业与生物学院园林科学与工程系，上海200240) 摘要通过L】6(45)正交试验，研究了镁离子浓度、dNTP浓度、模板DNA浓度、raqDNA聚合酶 X mm01．L一 应体系。优化体系为：25灿PCR反应体系中含有1Taq酶缓冲液(10mmol·L～KCl，8 (NH4)2S04，10mmol·L～Tris·HCl，pH9．O，0．05％NP40)，2 mmol·L～MgCl2，0．06U·灿一 Taq酶，0．4Ixmol·L。1引物，4．0 mmol·L～。 利用温度梯度PCR，确定了最适宜的退火温度为51．5℃。该优化体系的建立为下一步对小苍兰 进行ISSR分子标记奠定了基础。 关键词ISSR．PCR；小苍兰；优化；正交设计 中图分类号：$718．46；Q943．2文献标志码：A for ISSR-PCRofFreesia Klatt Optimization System refracta ThroughOrthogonalDesign ZHOU WUChen—WeiTANG SONGHui-ShuLIU Ling。Yu Dong—Qin Qun—Lu+ of and (School Jiao AgricultureBiology，ShanghaiTong 200240) University，Shanghai AbstractTheeffectsofvariousfactorsonISSR—PCR asconcentrationof reaction，such M92+．dNTPs and and DNA to theISSR．PCRre． primers，DNAtemplateTaq polymerase，wereinvestigatedoptimize action ofFreesia tests．The ISSR-PCRof system refracta throughorthogonal optimized systemF．re痧acta incloded DNA mmol·L。1 1×Taq polymerasebuffer(10 mmol·L—KCl，8mmo]·L‘1(NH4)2S04，10 Tris。HCl，pH9．0，0．05％NP-40)，2 DNA mmol·L～MgCl2，0．06U·IxL—Taqpolym