神经元型一氧化氮合酶在快速衰老小鼠海马中增龄性改变.docVIP

神经元型一氧化氮合酶在快速衰老小鼠海马中的增龄性改变 　　作者：张立红， 任天华， 方马荣， 姚大卫， 王铭维 作者单位：1. 河北医科大学第一医院神经内科， 河北石家庄 050031; 2. 香港中文大学医学院解剖学系， 香港沙田;3. 河北省脑老化与认知神经科学实验室， 河北石家庄 050031 　　【摘要】 【目的】 通过观察快速衰老小鼠(SAM)在衰老过程中海马中nNOS的分布和表达变化，探讨NO/nNOS在中枢神经系统衰老中的作用。【方法】采用雄性快速衰老亚系8小鼠(SAMP8)及抗快速衰老亚系1小鼠(SAMR1)为研究对象，其中SAMP8为实验组，SAMR1为对照组，每组动物再分为青年组(2月龄)和老年组(10月龄)两组，每个年龄组随机分配6只动物。用免疫组织化学法标记SAM海马中nNOS神经元，观察海马CA1，CA2和CA3区nNOS神经元的形态和分布，并计数nNOS神经元的数量;用RT-PCR法检测海马中nNOS mRNA表达水平(用平均灰度值表示)。【结果】老龄SAMP8海马中阳性神经元的形态与其它组比较无明显差别，但CA1和CA2区阳性神经元密度明显减低，CA3区阳性神经元密度无明显改变。SAMP8老年组与青年组相比，海马CA1和CA2区nNOS阳性细胞的数量显著减少(73±14 vs 144±38, P 0.01; 71±30 vs 126±39, P 0.05)，CA3区阳性神经元数量无显著差别;SAMP8与SAMR1比较，青年组海马nNOS阳性细胞的数量无显著差别，老年组海马CA1和CA2区阳性细胞的数量显著减少(73±14 vs 139±24, P 0.01; 71±30 vs 120±37, P 0.05)。SAMP8老年组海马nNOS mRNA水平明显低于青年组(0.43±0.17 vs 0.92±0.15, P 0.01)，且低于相应月龄SAMR1(0.43±0.17 vs 0.86±0.13, P 0.01)。【结论】海马中nNOS催化产生不足量NO可能加速SAMP8衰老，致使学习记忆能力下降，为通过调节NO产量来延缓衰老及衰老相关学习记忆能力下降提供了理论依据。 　　【关键词】 神经元型一氧化氮合酶; 一氧化氮; 衰老; 快速衰老小鼠; 海马 　　[J SUN Yat-sen Univ(Med Sci), 2007, 28(3):258-262] 一氧化氮(nitric oxide, NO)在中枢神经系统中是一种兼具细胞间、细胞内信使和神经递质作用的信息分子，在机体内发挥着极其重要的生理和病理作用[1]。随着对NO不断深入的研究，发现其与中枢神经系统衰老关系密切，已成为神经病学和神经生物学研究的热点之一[2]。一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)是NO生物合成的关键酶[3]，不同的NOS催化合成的NO在不同的组织细胞中发挥着不同的生物学效应，神经元型NOS(neuronal NOS, nNOS)产生的NO在学习记忆机制中起重要作用[4]。海马是与学习记忆功能最密切的脑区之一[5]。由于NO的半衰期很短，高度活跃，极不稳定，直接检测尚存在技术上的困难，因此多采用检测NOS的间接方法来反映组织细胞中的NO含量。目前，该领域的研究多采用正常衰老的动物为研究对象，而且研究结果不一致。快速衰老亚系8小鼠(senescence accelerated mouse/prone 8, SAMP8) [6]是目前研究衰老及衰老相关学习记忆功能障碍的良好的哺乳类动物模型，但是，有关nNOS在SAMP8海马中增龄性改变的研究，在国内外尚未见报道。本实验通过观察SAMP8在衰老过程中海马中nNOS的分布和表达变化，探讨NO/nNOS在中枢神经系统衰老以及衰老相关学习记忆障碍中的作用及意义。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物与分组 　　采用雄性SAMP8和抗快速衰老亚系1小鼠 (senescence accelerated mouse/resistance 1，SAMR1)为研究对象(由香港中文大学实验动物中心提供)，其中SAMP8为实验组，SAMR1为对照组，每组动物再分为青年组 (2月龄)和老年组(10月龄)两组，每个年龄组随机分配6只动物。饲养环境：动物饲养于无特异病源菌房间，昼夜循环周期为12 h∶12 h(6:00开灯，18:00关灯)，自由饮水饮食，温度(20±1)℃。 　　1.2 实验试剂与器材 　　nNOS多克隆抗体(一抗)购自Santa Cruz公司;驴抗兔FITC荧光抗体，激发光波长为488 nm(二抗)购自Molecular probes公司;Trizol、cDNA合成试剂盒、PCR试剂盒