肾透明细胞癌中VHL基因改变和趋化因子受体CXCR4表达与相关性.docVIP

肾透明细胞癌中VHL基因改变和趋化因子受体CXCR4的表达及相关性 作者：曹正国，孙友文，诸禹平，樊龙昌，苏 红，舒启安 作者单位：安徽医科大学附属省立医院泌尿外科，安徽合肥 230001 【摘要】 目的 研究肾透明细胞癌(CCRCC)组织中Von Hippel-Lindau(VHL)基因改变和趋化因子受体CXCR4的表达及其相关性，探讨VHL基因在CCRCC中的作用。方法 分别采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析、微卫星法、DNA甲基化特异性PCR和半定量逆转录PCR检测35例CCRCC和20例正常肾组织中VHL基因突变、杂合性缺失(LOH)、异常甲基化及CXCR4 mRNA的表达。结果 VHL基因在CCRCC和正常肾组织中的改变率分别为74.29%、5.0%，二者的差异有统计学意义(Χ2=24.45，P0.01)；VHL基因改变与CCRCC的临床分期、淋巴转移等密切相关(Χ2=4.05、5.18，P均0.05)，而与患者性别、年龄、病理分级、肿瘤大小等均无相关性(P0.05)。CXCR4 mRNA在CCRCC中的表达率为77.14%，显著高于正常肾组织的5.0%；CXCR4的表达与CCRCC的病理分级、淋巴转移密切相关(Χ2=7.35、4.24，P均0.05)，而与其他临床病理特征等均无相关性。相关性检验表明CCRCC中VHL基因改变与CXCR4的表达密切相关(Χ2=3.89，P0.05)。 结论 VHL基因突变和LOH导致其失活是CCRCC发生的重要分子机制，VHL基因和CXCR4可作为判断CCRCC预后的重要参考指标，并可负向调节CXCR4的表达。 【关键词】 肾透明细胞癌；VHL基因；趋化因子受体(CXCR4)；失活；甲基化；突变 肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma, CCRCC)是肾脏最常见的恶性肿瘤。虽然遗传学研究表明3号染色体短臂(3p)的缺失和易位与肾癌发生有关，但其分子机制尚不完全清楚。Von Hippel-Lindau(VHL)基因是Latif等［1］在1993年从VHL家族中成功克隆出来的一种肿瘤抑制基因，定位于3p25-26，全长约15kb，包含有3个外显子和2个内含子。大量研究证实VHL基因与肿瘤细胞生长、增殖及分化关系密切，在恶性肿瘤的诊断和治疗上具有重要的应用价值。趋化因子受体(chemokine receptor, CXCR4)是一种广泛存在于不同类型细胞表面上的G蛋白偶联受体。近年来的研究发现CXCR4在多种肿瘤细胞中表达并可能在肿瘤侵袭转移中发挥重要作用。本文分别采用微卫星标志法、聚合酶链反应-单链构象多态性分析(polymerase chain reaction single-strand conformational polymorphism, PCR-SSCP)、DNA甲基化特异性PCR(methylation-specific, MSP)和半定量逆转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR)检测CCRCC和正常肾组织中VHL基因突变、3p的杂合性缺失(loss of heterozygosity, LOH)、异常甲基化与CXCR4 mRNA的表达及二者的相关性，探讨VHL基因改变在CCRCC中的作用及其机制。 1 资料与方法 1.1 一般资料 收集我院和同济医院泌尿外科2004年1月-2006年12月手术切除并经病理证实的35例原发性非遗传性CCRCC患者的新鲜组织标本。所有患者术前均未行任何化疗、放疗，其中男性20例，女性15例；年龄33-75岁，平均(55.6±8.1)岁；左肾22例，右肾13例。癌组织取肿块非坏死部分，参照Fuhrman病理分级：Ⅰ级14例、Ⅱ级11例、Ⅲ级10例；Robson临床分期：Ⅰ期11例、Ⅱ期9例、Ⅲ期7例、Ⅳ期8例。20例正常肾组织取自肾结石行肾切除术后的标本。所有组织标本均为严格无菌采集后立即置-80 ℃冰箱保存备用。 1.2 主要试剂 基因组DNA提取试剂盒，武汉博士德公司产品；Trizol试剂，Gibco公司产品；Taq DNA聚合酶、dNTPs、TaKaRa RNA PCR (AMV) Ver 3.0 试剂盒，大连宝生物工程有限公司产品；Wizard Genomic DNA Purification试剂盒，Promega公司产品。 1.3 方法 1.3.1 组织基因组DNA和总RNA提取 取以上每份标本25-50 mg置于玻璃匀浆器碾碎后，基因组DNA和总RNA的提取步骤按照DNA提取试剂盒和Trizo