尾穗苋凝集素（aca）基因植物表达载体de构建.pdfVIP

山东 农 业 科 学 2011，6：10—13 ShandongAgriculturalSciences 尾穗苋凝集素 (ACA)基因植物表达载体的构建 田华英 ，庞彩红 ，夏 阳 ，包 颖 ，成 洋 ，李双云 ，李 丽 ， 刘翠兰 ，毛秀红 ，燕丽萍 (1．曲阜师范大学生命科学学院，山东 曲阜 273165； 2．山东省林木遗传改良重点实验室／山东省林业科学院，山东 济南 250014) 摘 要 ：尾穗苋凝集素(Amaranthuscaudatusagglutinin，ACA)是一种存在于尾穗苋种子中的贮藏蛋白，属 苋菜凝集索家族 ，对同翅 目害虫如蚜虫、褐飞虱、叶蝉等有明显的致死作用。植物表达载体 pCAMBIA2300— 35S—OCS带有35S启动子及终止序列、卡那霉素(Kan)抗性基因NPTII。载体pGEMT—ACA含有ACA基因， 通过PCR扩增出ACA基因。把植物表达载体pCAMBIA2300—35S—OCS和扩增后的ACA基因用KpnI和Sal I双酶切后经连接酶连接，得到植物表达载体 pCAMBIA2300一ACA。将该载体分别导人农杆菌GV3101和 LBA4404进行保存。 关键词：ACA基因；植物表达载体；构建 中图分类号：Q782 文献标识号：A 文章编号：1001—4942(2011)06—0010—04 ConstructionofPlantExpressionVectorofAmaranthus caudatusAgglutininGene(ACA) TIAN Hua—ying ，PANG Cai—hong ，XIA Yang“，BAO Ying ，XIAN Yang ， LIShuang—yun ，LILi，LIU Cui—lan ，MAO Xiu—hong ，YAN Li—ping。 (1．CollegeofUfeScience，Q NormalUnwe~ity，Q 273165，China；2．ShandongProvincial研 LaboratoryofForestTreeGeneticImprvoement／ShandongAcademyofForestry，Jinan250014，China) Abstract Amaranthuscaudatusagglutinin(ACA)，akindofstorageproteinexistedintheseedsofAm— aranthuscaudattts。belongedtoamaranthleetinfamilyandhad lethaleffecttohomopteranpestssuchasa- phid，Nilaparvatalugensandleafhopper．ThevectorpCAMBIA2300—35S—OCScontainedthe35Spromoter anditsterminationsequence，kanamycin(Kan)resistantgeneⅣP Ⅱ，andthevectorpGEMT—ACAcon— tainedtheACAgene．TheACAgenewasamplifiedbypolymerasechainreaction(PCR)fromhtevector．After cleavageby ，lIandSalIandlinkagebyligase，theplantexpressionvectorpCAMBIA2300一AcAwascon— structed．ThenthevectorwastransfomredintohteAgrobactriumtumefaciensGV3101andLBA4404forpreser- vation． Keywords ACA gene；Plantexpressionvector；Construction 蚜虫，隶属于同翅 目，包括球蚜总科和蚜总 害虫之一。蚜虫常聚集在植株的芽、花蕾、嫩叶或 科，具有分布广、种类多、寄主杂、危害大等特点。 嫩枝上，以尖利的口器刺吸植物汁液，