常量法粗蛋白测定中常见问题及方法.pdfVIP

《江西畜牧兽医杂~}2011年第3期 ·实验研究 · 文章编号：1004—2342(2011)03—0020一O1 中图分类号：$816．11 文献标识码：B 常 量 法粗 蛋 白测 定 中常 见 问题 及 方法 唐传辉 ，姜云立 (1．阜阳农业学校，安徽 阜阳 236000；2．怀远荆芡乡兽医站) 常量法粗蛋 白(即CP)测定是为确保原料及产 过 17mL。消化箱内部上方要经常清理以防杂尘落 品质量，很多饲料厂、面粉厂、植物油厂甚至是质检 入消化液 中，电压要稳定，最好装稳压器。可变电炉 部门经常使用的一种CP测定方法。但由于此法经 (1000W)温度按刻度控制在450％ 500~C之间(以 验性强，一旦操作不当则很容易出错。此文从取样、 电炉丝刚处在发 白状态为准)。蛋白含量在 25％以 称量、制样、蒸馏 、滴定等方面阐述了CP的测定技 下者消化 80～100min即可 ，以提高化验速度 ；蛋 白 巧和经验，以供参考。 含量在 25个以上者先消化 40～60min，再把温度调 1 取样 至最高档，消化40(夏季)～50min(冬季)。不能用太 在 CP测定取样时，取样的化验员往往过于重 低温度，也不能从开始就用最高温以防消化样四溅 视取样 的速度而忽视其科学性：样 品、原料的取样 影响消化时间。消化时间不要过长，否则会降低效 点太少，缺乏代表性。实际操作中，熟悉方法、科学 率，且可能造成消化过度而致结果不准。 取样，化验速度并不慢；而且 由于取样准确，测定次 4 冷却及定容 数少，反而有利于提高效率。以方形垛的豆粕原料 消化好后 ，关闭电炉并移开凯氏烧瓶，空气冷 为例，取样时首先要均匀布点 ，从中抽取 l5～25个 却 10—20min(根据天气)，观察颜色。若为纯正的蓝 点共 500～1000g原始样方可；然后用四分法获得 色(无棕红杂色)，即消化成功。加水溶解再冷却至 次级样品100～200g；再用高速粉碎机或果汁机打细 常温，以200mL或 250mL容量瓶定容并充分摇匀， 并集中拌匀，最后用小匙(小拇指头大小)一次性取 再用移液管取50mL的量进行蒸馏。这一过程的问 分析样0．5～1．5g(蛋白含量低的应多取)称量。产品 题常出现在冷却不够和定容过量上。加水后的冷 CP测定取样，要在出料时分时段进行。通常要接取 却 ，可放人盛凉水的容器上进行；定容到接近刻度 3-6次共 500g左右即可，按上述方法制取分析样1【l。 时，用普通的胶头吸管滴加至定容刻度。 2 称样和加样 5 蒸馏 分析样在进行消化前须用万分之一分析天平 是最易出错的环节之一。常见问题是器皿连接 精准称量，在分析天平上清零。化验员在称量前，最 不紧、吸收液及接收过程污染、加碱量不当、蒸馏终 好应先用洁净滤纸或A4纸，叠成槽型纸条，然后加 点把握不准和冲洗不彻底。蒸馏前，要先检查密闭 上分析样去称量；样称量好后，要加到250mL或 性，注意橡皮塞与定氮球的连接是否紧密 ，连接孔 500mL凯氏烧瓶底部；加好后连同残渣平托取出纸 是否打的圆。蒸馏时最好用500mL凯氏烧瓶，取 1／4 条，再称量纸条，取差值即为样品量。如果不注意操 或 1／5定容的消化液量 (也可称半量法，一般即50 作细节，易造成称量不准。