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SELDI技术流程.doc
SELDI-TOF蛋白质芯片简介
该芯片的设计源于基因芯片的设计方法和生物分子反应的原理。在一块微小的固体表面上结合抗体或抗原、DNA、酶、受体、单链抗体(scFV)L2:,作为摄取抗原或抗体、DNA结合蛋白、底物、配体、多样抗原等特异基质,再加上经化学修饰的二抗作为检测信号或直接检出,信号检测器为激光共聚焦扫描仪、荧光透射扫描仪、质谱仪等,检测到芯片上酌光或化学信号后传输给计算机通过软件包进行统计处理,可以获得有关蛋白表达的大量信息。2.2 色谱学或层析原理 这种芯片设计根据层析技术,结合质谱发展而来。设计芯片为可结合蛋白的固体点表面,如在固体表面涂渍疏水性碳水化合物(HydbDph6ZcSudhce,H4)、亲水表面(NoRyLBlPhase,NP)、特异性结合表面(keactivatedSudMe,赐)、强阴离子交换表面(ShDng AnioH Exchan8e,SAx)、弱阳离子交换表面(Weak Ca60H Exahange,WCx)、固定金属亲和表面(iMlob勋朋d MetalASniqr C叩ture,IMAC)等表面涂渍物可以非特异或特异性结合蛋白质,结合能量吸收分子(EnerBdbsorb matdx,EAM)后,在真空管中用激光轰击,蛋白质在吸收能量后脱离芯片表面,由于其中加有一个正电荷,在电场中向阴极飞去,分子量大的飞行时间长,分子量小的飞行时间短,以此标记蛋白质的分子量,绘出蛋白质的图谱,该项技术总称为表面增强激光解析及电离飞行时间质谱SEUI—TOF—MS(Sudace Ehanced比er DesorptioVIom。z此oH—time of n炒t—Mass SpechDme卸)[3j,由于质谱检测的灵敏度高,可把传统方法检测不到的蛋白和多肢检测出来,因此对肿瘤标记物的筛选意义重大。该项技术如果联合检测前的样品分段萃取分离和检测后的专用蛋白图谱统计软件分析,可以快速的找出新的肿瘤标记物并获得尽可能多的蛋白组学信息。其优点是方便、快速、灵敏度高、蛋白信息量多。SELDI蛋白质芯片技术在肿瘤蛋白质组学研究中的应用及进展摘? 要 ?20世纪90年代开始实施的人类基因组计划(HGP),揭示了大量的基因序列,在基因的物质结构和遗传学上以及疾病与基因的关联上取得了很大的进展[1]。随着基因计划的完成,生命科学已进入后基因时代,研究的重点已从揭示生命所有遗传信息转移到从整体水平上对生物功能的研究??
张青云1 孙丽2
1北京大学临床肿瘤学院,北京肿瘤医院检验科 北京市肿瘤防治研究所免疫研究室,北京 100036,
2锦州医学院生物化学与分子生物学教研室,锦州,121000
20世纪90年代开始实施的人类基因组计划(HGP),揭示了大量的基因序列,在基因的物质结构和遗传学上以及疾病与基因的关联上取得了很大的进展[1]。随着基因计划的完成,生命科学已进入后基因时代,研究的重点已从揭示生命所有遗传信息转移到从整体水平上对生物功能的研究。而以生命功能的主要执行者和体现者--蛋白质为研究对象的蛋白质组学(proteomics)就显得越来越重要了。其中肿瘤蛋白质组学是从细胞整体水平上认识在肿瘤的发生、发展过程中蛋白表达谱的变化。为了达到这个目的,就需要高通量、快速简便的技术平台支持。蛋白质芯片SELDI-TOF MS(Surface Enhanced Laser Desorption and Ionization time-of-flight mass spectroscopy 表面增强激光解析电离-飞行时间-质谱)是一种新的蛋白质组学研究技术,正具有这种优势,可有效的应用于此项研究。本文综述了近年来SELDI-TOF MS在肿瘤蛋白质组学方面的应用及进展。
1 肿瘤蛋白组学的概念和研究内容
1994年澳大利亚的Wilkins[2]首先提出了蛋白质组(proteome)的概念:即基因组所表达的全部蛋白质。它有别于传统的单个基因或单个蛋白的研究模式,从机体或细胞的整体水平上来阐明生物体全部蛋白质的表达、修饰、结构功能和相互作用。因此产生了一个新的研究领域――蛋白质组学(protemics)。其中肿瘤蛋白质组学主要是比较分析肿瘤组织细胞与正常的组织细胞、肿瘤在不同发展时期的细胞内整体蛋白质的差异,获得肿瘤异质性的信息。肿瘤蛋白质组学研究的主要内容有:建立各种肿瘤的蛋白质组数据库、寻找肿瘤相关蛋白质、分析肿瘤相关蛋白质的结构和功能,鉴定出肿瘤标志物,进而为肿瘤诊断、治疗、预防以及发病机制的研究提供新的依据。
2 SELDI-TOF MS技术简介
其主要有三部分组成:蛋白质芯片(Protein Chip)、芯片阅读器(protein chip reader)和分析软件。
蛋白质芯片是SELDI-TOF MS的核心技术。根
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