常用鉴定试剂的配制和应用(5页).docVIP

常用鉴定试剂的配制和应用 （一） 通用试剂 1. 碘试剂 检查一般有机化合物 （1） 碘蒸气 预先将盛有碘结晶的小杯置于密闭的玻璃容器内，使容器空间彼碘蒸气饱和，将薄层置于容器内数分钟即显棕色斑点。有时，于容器中加放一小杯水，增加容器内的湿度，可提高显色的灵敏度。 （2） 0.5％ 碘的氯仿溶液 喷洒试剂，置空气中待过量的碘挥发后，喷1％ 淀粉溶液，斑点由棕色转为蓝色。 硫酸试剂 检查一般有机化合物 5％ 硫酸乙醇溶液作为色谱显色剂用。喷洒后，置空气中干燥15 min，100℃烤至斑点呈色（不同化合物呈不同颜色）。 重铬酸钾-硫酸试剂 检查一般有机化合物 5g重铬酸钾溶于100m1 40％ 硫酸中。喷该试剂后，150℃加热至斑点出现（不同化合物呈不同颜色）。 4. 磷钼酸试剂 检查还原性成分 5％ 磷钼酸乙醇溶液。喷洒后，120℃加热至呈蓝色斑点。 5. 磷钨酸试剂 检查还原性成分 20％ 磷钨酸乙醇溶液。喷洒后，120℃烤，还原性物质呈蓝色斑点。 6. 硝酸银-氢氧化铵试剂 检查还原性成分 浴液Ⅰ：0.1mol／L硝酸银溶液。溶液Ⅱ：10％ 氢氧化铵溶液，临用前溶液Ⅰ和Ⅱ以1∶5混合。喷洒后105℃加热5 min～ 10 min，至深黑色斑点出现。 7. 中性高锰酸钾试剂 检查易还原性成分 0.05%高锰酸钾溶液。喷洒后粉红色背景上显黄色斑点。 8. 碱性高锰酸钾试剂 检查还原性成分 溶液Ⅰ：1％ 高锰酸钾溶液。溶液Ⅱ：5％ 碳酸钠溶液。溶液Ⅰ和Ⅱ等量混合使用，喷洒后，粉红背景上显黄色斑点。 9. 四唑蓝试剂 检查还原性成分 溶液Ⅰ：0.5％ 四唑蓝甲醇溶液，溶液Ⅱ：25％ 氢氧化钠溶液。临用前两液等量混合。喷洒后，微热或室温放置显紫色斑点。 10. 荧光素-溴试剂 检查不饱和化合物 溶液Ⅰ：0.1g荧光素溶于100ml乙醇中。溶液Ⅱ：5g溴溶于100ml四氯化碳中。先喷洒溶液Ⅰ，然后将薄层板放入盛有溶液Ⅱ的缸内，黄色斑点出现后，于紫外光灯下检视，红色底板上显黄色荧光斑点。 11. 荧光显色试剂 检查一般有机化合物 （1） 0.2％ 2.7-二氯荧光素乙醇溶液。 （2） 0.01％ 荧光素乙醇溶液。 （3） 0.1％ 桑色素乙醇溶液。 （4） 0.05％ 罗丹明B乙醇溶液。 喷洒任一溶液，不同的化合物在荧光背景上可显黑色或其它荧光斑点。 （二） 苷类鉴定试剂 1. 糖鉴定试剂 （1） α-萘酚-硫酸试剂 检查还原糖 ①溶液Ⅰ：10％ α-萘酚乙醇溶液。溶液Ⅱ：硫酸。取1ml样品的稀乙醇溶液或水溶液，加入溶液Ⅰ 2滴～3滴，混匀，沿试管壁缓缓加入少量溶液Ⅱ，二液面交界处产生紫红色环为阳性反应。 ②15% α-萘酚乙醇溶液21m1、硫酸13m1、乙醇87ml及水8ml混匀后使用。喷洒于薄层板上，100℃烤3 min～6 min，多数糖显蓝色，鼠李糖显橙色，所显颜色于室温可稳定2天～3天。 （2） 斐林试剂 检查还原糖 溶液Ⅰ：6.93g结晶硫酸铜溶于100ml水中。溶液Ⅱ：34.6g酒石酸钾钠、10g氢氧化钠溶于100ml水中。取1ml样品热水提取液，加入4滴～5滴用时配制的溶液Ⅰ、Ⅱ等量混合液，在沸水浴中加热数分钟，产生砖红色沉淀为阳性反应。如检查多糖和苷，取1ml样品水提液，加入1m110% 盐酸溶液，在沸水浴上加热10 min，过滤，再用10％ 氢氧化钠溶液调至中性，按上述方法检查还原糖。 （3） 氨性硝酸银试剂 检查还原糖 硝酸银1g，加水20ml溶解，小心滴加适量氨水，边加边搅拌，至开始产生的沉淀将近全部溶解为止，过滤，取lml样品的水溶液，加入1ml试剂，混匀后，40℃微热数分钟，管壁析出银镜或产生黑色沉淀为阳性反应。本试剂也可作为色谱显色剂，喷洒后于110℃加热数分钟，显棕黑色斑点为阳性反应。还原性物质如醛类、邻二酚类等有干扰。 （4） 茴香醛-硫酸试剂 检查糖类化合物。 硫酸lml加到含茴香醛0.5ml的乙酸溶液50ml中，需临用前配制。喷洒于薄层板上；105℃加热至显示色斑，不同糖显不同颜色。 （5） 苯胺-邻苯二甲酸试剂 检查糖类化合物 苯胺0.93g和邻苯二甲酸1.66g溶于100ml水饱和的正丁醇中。作色谱显色剂用。喷后105℃烤5 min，显红棕色斑点。 （6） 1,3-二羟基萘酚-磷酸试剂 检查酮糖、醛糖 0.2％ 1,3-二羟基萘酚乙醇溶液50ml与85％ 磷酸50ml混合均匀后使用，喷后105℃烤5 min～10 min，酮糖呈红色，醛糖显淡蓝色。 （7