作业浅谈植物DNA提取方法的研究进展.docVIP

作业：浅谈植物DNA提取方法的研究进展 摘 要：DNA分子的提取是对分子生物学进行深入研究的基础。而如何高效而快速的提取制备植物DNA又是DNA提取研究的工作中心。不同的植物因自身所含的物质成分或浓度不同，所适合的DNA提取方法也会有所差异，不同的方法对其提取效果也会有所不同。本文主要介绍了近年来国内外几种常用的DNA提取方法：如传统的十六烷基三乙基溴化铵（CTAB）法、SDS法，并对其进行了简单的归纳总结与比较分析。同时介绍了一些新的改良方法和其他植物提取方法。 关键词：植物 1 引言 植物DNA的制备是分子生物学对各类植物进行深入一步研究的基础，所制备的DNA质量的好坏直接关系到后期分子生物学研究实验的成败。因此对所提取出的植物DNA在纯度浓度等方面提出了较高的要求。然而，由于植物组织细胞中含有大量复杂的次生物质，如提取液中常含有如多糖类（植物自身的多糖类极易黏合成粘稠状的叫状物质，而为DNA的分离加大了难度）、多酚类（多酚极容易氧化，与DNA双链产生不可逆的结合而影响到DNA的溶解）、RNA、蛋白质、单宁和色素等物质，容易对DNA进行污染，直接影响到所制备的DNA纯度，使得DNA的提取达不到预期的提取效果。如果不及时清楚去，很可能还会对后期实验的继续进行存在着重大的影响。因此，要想从植物中分离提取出高质量的DNA还是存在着比较大的困难。目前研究发现的DNA提取方法有很多，其中被应用最为广泛的DNA提取方法有传统的十六烷基三乙基溴化铵（CTAB）法和SDS法。但是由于不同植物的材料组分各异，而植物其自身所含的多糖、蛋白质、酚类物质也各有不同，相同的物质浓度也会出现偏差，就使这些模式植物的DNA提取方法对不同植物DNA的提取并没有达到预期效果。相同的提取方法并不适合所有的植物，不同的植物最适合的提取方法也不同。许多的学者一直都在不断地探索着不同的DNA提取方法，研究新的方法，并针对不同的植物，在传统的提取方法上进行着一些新的改良。 2十六烷基三乙基溴化铵（CTAB）法 在众多的DNA提取方法中，CTAB法是目前应用最为广泛的一种方法。它既可以裂解细胞，又可以有效地去除多酚类和多糖类物质的沉淀，因而最为经常被学者使用于植物DNA的提取工作中。 ?2.1原理及方法 CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)是一种阳离子去污剂,可溶解细胞膜。同时它能与核酸形成复合物, 这些复合物在高盐溶液中(0.7 mol/LNaCl)是可解离的,从而使DNA和多糖分开。当降低溶液盐浓度到一定程度(0.3 mol/L NaCl)时,这些复合物将会从溶液中形成沉淀。再通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白类、多糖类物质分开。而对富含多酚、多糖植物组织则通过增加提取缓冲液中β-巯基乙醇用量,便能够有效地控制酚类物质的氧化褐变及DNA的降解。在除蛋白质的步骤中,只需适当的增加氯仿/异戊醇的量和使用次数,便能够很好的使得蛋白质的去除更加完全,从而提高产物的纯度。最后再用乙醇沉淀DNA，以除去CTAB。 2.2适用范围及一些改良 CTAB法由于能有效地去除多糖及酚类物质的沉淀，因而适用于含酚类及糖类物质较高植物材料的总DNA提取。於朝广,殷云龙在对落羽杉属树木基因组总DNA的提取中发现，CTAB是提取效果最好的方法，而且试验中所有材料的DNA都是一次性的提取成功，并且获得的量较大。胡薇,陈宇,林来水等人在黑木相思基因组DNA的快速提取中发现，黑木相思基因组DNA用CTAB法效果最好，速度快，纯度和得率都很高。李树华,何军,杨淑琴等人在对野生稻、野燕麦、枸杞DNA的提取方法研究中也发现CTAB法比较适合野生稻和野燕麦的DNA提取。梁雪莲,郑奕雄,陈晓玲等人在对花生DNA提取方法比较中发现，CTAB法操作较简单,所得产物杂质较少,降解程度轻,并可提取到高质量的DNA,对于花生DNA的提取为最有效果的。 尽管传统的CTAB提取法对于植物DNA的提取比较常用，但是由于它本身过程相对复杂，对于不同植物的DNA提取效果会有所偏差，因而众多学者在原有的基础上针对不同的植物特点，对一些提取步骤进行了改进，从而获得高质量理想的DNA。便于以后分子生物学的深入研究。 李先进,彭正松,张正英等在对四种药用蕨类DNA提取的比较研究中发现，用CTAB法获得的效果最好,获得的DNA纯度较高、产量较大。但是因为酚类物质极为易被氧化,所以可以在最开始研磨材料的时侯加入4% PVP,从而防止在研磨中细胞组织破裂后酚的氧化，从而获得更理想的DNA。在植物总DNA的提取方法的改进研究中，黄永莲,刘媛,黄真池等人在传统CTAB法的基础上作了一些新的改进，用改良的CTAB法提取菠菜和榕树叶片DNA，能获得了良好的效果。首先将材料在4℃的冰箱中静静放置1~2 d,以便于其叶片中的多糖类物质的降解；