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前言 栽培花生（Arachis hypogaea），也叫落花生，隶属于植物界，种子植物门，双子叶植物纲，豆目，蝶形花科，落花生属，落花生种。是起源于南美洲的一年生豆科作物，是一种重要的经济作物和工业原料。在油料作物中，花生种植面积仅次于油菜，在世界油脂生产中占有举足轻重的地位。中国花生总产量已跃为世界第一，目前我国是世界上最大的花生生产、消费和出口国，年总产1450万吨左右，年出口60-80万吨，因此花生也是我国重要的油料作物。 长期以来，花生病毒病、花生细菌病以及虫害是影响我国花生生产的主要限制因素，对我国花生生产造成巨大的经济损失，严重影响花生的产量和品质。改进栽培措施和施用化学杀菌剂不能从根本上解决问题，而化学药剂所带来的环境污染和病原抗药性生理小种的形成等问题又给病害防治带来了更大的障碍。培育抗病品种被认为是最为有效的防治方法，但常规育种很难在短期内育成具有较高抗性的优良品种。随着生物技术的发展，以及对植物免疫抗病途径及其关键基因认识的不断深入，利用基因工程的方法提高并改善花生抗病能力必将成为重要手段。 所谓基因工程育种即转基因育种，是利用遗传转化培育具有特定目标性状新品种的一种方法。首先要根据目标，从供体生物中分离控制某种性状的基因，然后通过基因工程技术导入受体作物，经过筛选获得稳定表达的遗传工程体，最后经田间实验育成转基因新品种或新品质。 因此，我们希望把一种具有抗病功能的基因整合到花生植株中，从而使花生植株获得较好的抗病性。亲环素(cyclophilins，CyPs)属于亲环素家族(包括亲环素、FK506和雷帕霉素)，存在于所有生物体，并广泛分布于细菌、动物、真菌和高等植物的细胞液、细胞核、细胞质、内质网、线粒体、分泌通道、高尔基体等各种细胞器以及细胞外的其他场所。Handschumacher等[1]1984 年首先从哺乳动物环孢素A(cyclo sporin A，CsA)的细胞受体中发现了亲环素。环孢素A为11个氨基酸的环状多肽，是具有免疫抑制剂活性的真菌代谢物，可以预防和治疗器官移植后的排斥反应或移植物抗宿主反应[2，3]。亲环素具有肽脯氨酰顺反异构酶(peptidyl-prolylcis-transisomerase，PPIase)的活性， 是蛋白质折叠的限速步骤，在蛋白质折叠、输送和相互作用、抑制T细胞活化、细胞生长、成熟、细胞凋亡以及信号传导等多种生理活动中发挥关键作用[2～11]。亲环素是多基因家族，分为脊椎动物、无脊椎动物、其他后生动物(Metazoa)、植物、真菌及原核生物(prokaryotes)等6个亚族[5]。植物亲环素除具有其他生物亲环素的功能外，还具有独自的特点，在植物生物学、胁迫应激应答以及抗病原体免疫等方面发挥重要作用[9]。 现代的克隆技术和转基因工程技术的发展已经很完善，我们发现了这种亲环蛋白基因后，就可以利用基因工程的方法将其运用到抗病育种工作中，从而使花生获得广谱抗性，进而加快花生抗病育种的进程。因此，在提倡少用对环境造成污染以及影响人类健康的化学药品的今天，亲环蛋白基因在花生抗病性农业生产方面的应用前景是十分乐观的。 1、论文综述 1。1花生基因工程的研究进展和存在的问题 长期以来，花生病毒病、花生细菌病以及虫害是影响我国花生生产的主要限制因素，对我国花生生产造成巨大的经济损失，严重影响花生的产量和品质。改进栽培措施和施用化学杀菌剂不能从根本上解决问题，而化学药剂所带来的环境污染和病原抗药性生理小种的形成等问题又给病害防治带来了更大的障碍。培育抗病品种被认为是最为有效的防治方法，但常规育种很难在短期内育成具有较高抗性的优良品种。随着生物技术的发展，以及对植物免疫抗病途径及其关键基因认识的不断深入，利用基因工程的方法提高并改善花生抗病能力必将成为重要手段。 目前在花生优质改良、抗病性、抗虫性、抗病毒、抗除草剂、抗逆性及作为生物反应器等方面开展了转基因技术应用研究，获得了越来越多的转基因花生品系。 转基因工程在育种方面有了很大的发展，取得了不少的成果。但也存在一些问题，如转化技术的效率不高，外源基因随机整合及基因沉默，外源基因的安全性等，有待进一步研究和完善。 而且目前的转化体系通常都使用选择标记基因。但是，当筛选得到转基因植株后，这些选择标记基因就失去其作用了。不仅如此，他的存在还会带来其他问题。一方面，当需要转入新的外源基因时必须使用另外一种标记基因，而目前可供选择的标记基因种类非常有限；另一方面，各种基因的安全性也值得考虑。获得无标记基因的转基因植株是我们努力的目标。 高效的植株再生技术也是植物基因工程必要的前提之一。20世纪90年代以前以不同的花生组织、器官为外植体通过器官发生和体胚发生途径再生植株均获得成功，但再生效率低；90年代以来，花生遗传转化和再生技术不断发展，