整合素α5、β1及Lewis+y抗原在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达及意义.pdfVIP

·中文论著摘要· 整合素仅5、B1及LewisY抗原 在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达及意义 刖 声 卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，浆液性囊腺癌是其中最常见的卵 巢恶性肿瘤，占卵巢恶性肿瘤的40-60％，因此，探索有效的卵巢浆液性囊腺癌 诊断及治疗方法有重要意义。 整合素是广泛存在于动植物细胞表面的一类细胞黏附分子，是由0【和D两个 亚单位靠非共价键连接形成的异源双体跨膜糖蛋白。a5131由0【5和B1两个亚单位 组成，a亚单位与配体的识别有关，t3亚单位则将信号传导至细胞骨架。近年研究 显示整合素a5131与恶性肿瘤的发生、发展也有一定关系，它通过介导肿瘤与基 底膜、肿瘤与宿主细胞黏附及信号转导等多个环节，直接或间接地影响肿瘤细胞 转移与凋亡、促进肿瘤中血管的生成，从而促进肿瘤细胞的生长和转移。 糖基抗原亦表达于细胞膜，是糖类和蛋白质或脂类共价结合形成糖复合物， 参与很多细胞功能，包括黏附、识别和信号转导。LewisY抗原是某些糖蛋白和糖 脂的末端寡糖，为双岩藻糖寡糖，是一种II型血型相关抗原。Lewis Y抗原存在于 上皮组织中，包括卵巢、胸腺、肺、胃及结肠等，当这些组织发生癌变时，Lewis Y 表达明显增高，且增高的患者预后不佳。 本研究选取了卵巢浆液性囊腺癌、交界性卵巢浆液性囊腺瘤、卵巢浆液性囊 腺瘤以及正常卵巢病例的石蜡标本，应用免疫组织化学染色方法，检测Lewis Y 抗原、整合素a5及pl的表达情况，探讨LewisY抗原、整合素a5及p1与卵巢 浆液性囊腺癌的相互关系，以期为卵巢浆液性囊腺癌的诊断和治疗提供进一步的 实验基础。 实验材料与方法 一、实验材料 选取2006年至2008年中国医科大学附属盛京医院妇产科64例手术切除的 卵巢石蜡标本，所有选取病例术前均未经放化疗，病理切片均经HE染色后由病 理专家确诊。所有病例分为四组，卵巢浆液性囊腺癌组30例，患者年龄36～73 岁，平均年龄55．7岁；交界性卵巢浆液性囊腺瘤组10例，患者年龄22～55岁， 平均年龄33．8岁；卵巢浆液性囊腺瘤组13例，患者年龄15～72岁，平均年龄44 岁；正常卵巢组11例，患者年龄37、-52岁，平均年龄43．6岁。 二、实验方法 (一)切片预处理及切片病理组织检测 切片预处理后，采用免疫组织化学染色方法检测lewis Y抗原、整合素0‘5和 整合素p1的表达，免疫组织化学染色具体步骤如下： l、石蜡切片常规二甲苯脱蜡，梯度酒精水化。 2、新鲜配制的3％H202孵育10．15分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性， 蒸馏水冲洗3次。 3、将切片浸人0．01M的EDTA中微波炉抗原热修复。冷却后PBS洗涤3次。 4、滴加正常血清封闭液，室温孵育20分钟，倾去血清， 5、滴加1：200稀释一抗，4。C过夜。PBS冲洗3次，每次2分钟。 6、滴加生物素化二抗，37℃孵育30分钟，PBS冲洗3次，每次2分钟。 7、滴加辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素，37℃孵育5分钟，PBS冲洗3次， 每次5分钟。 8、DAB显色，蒸馏水充分冲洗，苏木素核复染，脱水，透明，封片。 一阴性对照采用PBS代替第一抗体，其它步骤不变。 (二)结果判定 细胞膜或细胞浆出现棕黄色或黄色着色判定为阳性。结果观察采用双盲法，由 两位病理科医师分别观察所获得的一致意见为最终结果。每张切片随机选取5个 高倍视野(×400)根据阳性染色强度和阳性细胞所占百分比进行综合判断。染色 程度：不着色记为0分，淡黄色记为1分，棕黄色记为2分，棕褐色记为3分； 着色细胞百分数：阴性为0分，1％10％为1分，11％-25％为2分，26％50％为