艾灸“百会”穴对快速老化小鼠海马神经发生基因表达的影响.pdfVIP

Rapgef5，仅有1 条Klk6 基因下调；艾 组与模型组比较，7 条基因表达上调，分别为Apaf1、 Dclk1、Efnb1、Epm2a、Gli3、Nrxn3、Reln，无基因表达下调。结论：艾 “百穴”能有效 影响SAMP8 小鼠海马神经发生基因表达，其中主要影响Apaf1、Dclk1、Efnb1、Epm2a、Gli3、 Nrxn3、Reln 基因。 【关键词】艾灸疗法；快速老化小鼠；海马神经发生；干细胞基因芯片 我们前期研究结果表明，针 能有效的促进海马神经干的增殖、分化，同时改善学习记 忆能力 ［1-5］。但针 促进海马神经发生机制是什么，是通过哪些环节产生作用，目前并不 清楚。研究显示，海马神经发生的激活，受到众多因素的影响 ［6-11］，如环境、激素、细胞 因子、生长因子、神经递质、外加刺激等多种因素。针灸作用于机体，其作用环节并非单一 性，而是具有整体性、综合性的特点已达成共识。因此，从单一环节入手去探讨其作用机理 都会存在某些局限。生物体内物质遵循从基因到蛋白到功能的一个过程，即生物体任何一个 物质及其产生功能效应，都具有相应的基因基础，故我们抓住基因这个本质因子为切入点， 对针 促神经发生的机制进行相应的研究探讨。 1. 材料与方法 1.1 动物与分组 快速老化小鼠 （SAMP8）8 只，雄性，8 月龄，体重22±2g。抗快速老化小鼠 （SAMR1） 5 只，雄性，8 月龄，体重22±2g。购于天津中医药大学第一 属医院老年脑病研究室动物 中心，清洁级，合格证号：W-J 津实动质M 准字第006 号。在实验前适应性饲养一周，自由 进食、饮水，节律光照：LD=12：12。动物房温度、湿度分别维持在26℃、70%左右。随后称 重、编号，采用随机数字表方法进行分组，将SAMP8 小鼠随机分为快速老化组（简称模型组）， 艾灸治疗组 （简称艾 组），各4 只；SAMR1 小鼠4 只为正常对照组 （简称对照组）。 1.2 主要仪器与试 NanoDrop® ND-1000：thermo 公司，TaKaRa PCR Thermal Cycler （宝生物工程有限公司）， DYY-8 型稳压稳流电泳仪 （上海琪特分析仪器有限公司），H6-1 微型电泳槽 （上海精益有机 玻璃制品仪器厂），全自动芯片洗涤工作站 （美国Affymetrix 公司），高分辨率芯片扫描仪 （美国Affymetrix 公司），滚动式芯片杂交仪 （美国Affymetrix 公司），Rotor-Gene 3000 Realtime PCR 仪 （Corbett Research） 引物设计软件：Primer 5.0，Rotor-gene 6.0 （Corbett Research），TrueLabeling-AMP™ 线 性RNA 扩增试剂盒 （SuperArray），化学发光检测试剂盒Chemiluminescent Detection Kit (SuperArray Bioscience, Catalog Number D-01) 159 1.3 干预方式 于小鼠头顶两耳根连线中点(顶骨正中)取 “百会”穴。操作者先左手固定小鼠，右手持眼 科剪剪去穴位区皮毛。先用艾绒制备麦粒大小的艾炷，治疗时操作者左手固定小鼠，在穴位 上涂抹凡士林，然后右手用镊子持一粒艾炷，放在穴位上，用线香点燃艾炷，勿吹，待其自 然熄灭后，再燃另一炷，共燃三炷。每天治疗 1 次，7 天为一疗程，共治疗3 个疗程，疗程 间休息2d。对照组和模型组：除不予艾灸治疗外，每天在相同的时间，给予同等方式的抓取 和固定。 1.4 芯片检测 采用Oligo Neruogenesis and Neural Stem Cell Microarry （Catalog No.OMM-404）进 行检测，由上海康成生物工程有限公司提供，共263 条基因。具体检测步骤: （1）RNA 提取： 取50mg/样海马组织加Trizol 裂解后匀浆，加氯仿抽提1 次，转移水相加异丙醇抽提，离心 沉淀 RNA, 75%乙醇洗涤，空气中干燥沉淀 5min。加人无 RNA 酶的水溶解，紫外分光光度计 及琼脂糖变性凝胶电泳进行RNA 度、浓度及完整性检测。（2）探针合成：加10μl 预热的 RT 混合液到10μl 退火混合液中，混匀后42℃孵育90min，经反应得到cDNA 探针。（3）芯 片杂交：60℃下6rpm 预杂交1.5h 后 ，加入含探针