细胞的迁移性，趋化性和侵袭性的检测方法.pdfVIP

390 中国医药生物技术 2014年 1O月第9卷第5期 ChinMedBiotechnol，October2014，Vo1．9，No5 DOI：10．3969／cmba．j．issn．1673—713X．2014．05．015 · 技 术 与 方 法 · 细胞的迁移性，趋化性和侵袭性的 检测方法 HilarySherman，PilarPardo，ToddUpton 细胞的迁移性，是指细胞受到外来信号的刺激，由一个 520nm 发射光的吸收检测功能)。 地方迁移到另一个地方的特性，通常发生在 比如伤 口愈合、 1．2 方法 细胞分化、胚胎发育和肿瘤转移的过程中。细胞的侵袭性和 将细胞培养到足够的数量并需单独培养一盘相对浓度 迁移性相似，但不同的是，发生侵袭时，细胞需要降解一层 较低的细胞，以便做标准曲线检测。 胞外基质 (ECM)或者基底膜基质 (BME)进而迁移到一 第 1天：将细胞进行饥饿处理，同时用基底膜提取物 个新的地方。当正常细胞发生炎症反应，或者肿瘤细胞发生 包被 transwell设备；第 2天：将细胞平铺在 transwell中， 转移时都需要细胞的侵袭性。由此可见，了解这些特性的发 并用 FBS作为诱导剂，可以同时考虑多加一个实验组用于 生机制，对整个生物学研究有着重要而深远的意义。 绘制标准曲线；第 3天：检测通过基底膜的细胞数量，并 由康宁公司研发的 transwell培养设备的出现，为在体 绘制标准曲线。 外研究细胞的趋化性和侵袭性提供了一种相对简便的方法。 1．2．1 细胞培养 细胞的密度应该低于 80％，这样可以保 通常的侵袭检测系统是由胶原蛋白、纤连蛋白、层黏连蛋白 证经过 24h饥饿处理的细胞也不会长得过于密集，吸去含 等复杂的胞外基质和基底膜基质组成。还有更复杂的检测手 有血清的细胞培养基，轻轻地用 PBS清洗细胞去除残留的 段是在复合蛋白层膜上培养单层表皮细胞。将分泌多种生长 血清，用不含血清的 IMDM 培养细胞，放置于培养箱中培 因子的细胞培养在可渗透层膜上作为趋化源的系统，也可以 养 24h。 用于趋化性检测或者更繁杂的侵袭性检测。 1．2．2 BME 的包被 在检测过程中，不同的细胞系所需 下面所述的方法步骤是基于 BME层膜的细胞侵袭性 的 BME 的最适浓度有所不同。对于特定的细胞系，建议 检测，附以趋化性检测为例 (对于不含 BMC和 ECM 层 做一个梯度检测 (比如从 0．1×到 1×稀释)从中找出最 膜的侵袭性检测也遵循类似的方法)。这里具体列出了以康 适浓度。只有在最适的 BME浓度下 ，才可以看到细胞的 宁 96孔 transwell设备为例的实验参数。对于不同规格的 侵袭性和非侵袭性在趋化诱导作用下的最大差异。 系统可以根据下面表格中的数据调整材料或试剂的用量。 (1)在无菌条件下，用无菌去离子水将 10×的包被储液 稀释成 1×。 1 材料与方法 (2)将 5×的 BME储液放到 37℃ 水浴中，轻轻搅动 1．1 材料 瓶子使其完全融化。融化后的 BME 储液应尽快稀释或者 1．1．1 细胞系 非侵袭性 MCF一7细胞系 (人类乳腺癌细 放在冰上，否则其在稍高温度下将会变得非常黏稠。 胞)、侵袭性 HT1080细胞系 (人类纤维肉瘤细胞)均购 白 (3)用 1×的包被液将 5×的 BME稀释到最适的浓 美 国 ATCC。 度。 11．2 检测平板类型 8gm 孔径的 96孔 HTStranswell (4)用稀释后的 BME 溶液包被 transwell(表 1)。 培养系统、96孔黑