缺氧诱导因子-1α对A549细胞株中生存素表达及其生物学特性的影响.pdfVIP

4年 2月第 8巷第 4 4 · 基 础 论 著 · 缺氧诱导因子一10c对A549细胞株中 生存素表达及其生物学特性的影响 舒红梅 赵成岭 孙艳 李伟 陈余清 【摘要】 目的 观察非小细胞肺癌细胞株A549中缺氧诱导因子 let(HW—la)对生存素转录的 调控作用及对 A549细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法 用凝胶电泳迁移率实验 (EMSA)检测生 存素启动子序列与核蛋白结合的情况。EMSA实验分为阴性对照反应组、结合反应组、探针冷竞争 反应组、突变探针的冷竞争反应组和特异性抗体反应组。应用脂质体将载体pcDNATM6．2-GWE／mGFP miRNAHIF．1et质粒和阴性 (错义链)、内参 (13-肌动蛋白)微小 RNA (miRNA)质粒转染 A549 细胞。转染分为未处理组 (正常A549细胞)、HIF．1a沉默组 (转染 HIF—letmiRNA质粒)、阴性 对照组和内参组。杀稻瘟菌素筛选阳性克隆扩大培养；用逆转录．聚合酶链反应 (RT—PCR)和蛋白 免疫印迹法筛选出对A549细胞干扰效果最佳的miRNAHIF一10【干扰载体：常氧、缺氧条件下检测各 组中HIF．1a、生存素在mRNA和蛋白水平的变化；用细胞计数法、流式细胞术和转移小室迁移试验 检测各组细胞增殖、凋亡及迁移细胞数。结果 (1)T_32p标记的生存素启动子序列一26～一9bp 与A549细胞核蛋白作用，该条带可与HIF．1a抗体结合产生特异性抗体结合条带：(2)常氧下HIF．1et 沉默组的 HIF．1et和生存素 mRNA 分别为 0．313±0．051和 O．060±0．008，明显低于未处理组的 1．042±0．036和 1．071±O．016(F=436．433，0．002，均PO．05)；HIF．1et和生存索的蛋白含量分别 为0。559±0．051和 0．051±0．003，未处理组分别是 1．452±0．146和 0．194±0．007，两组比较差异有统 计学意义 (，值为53．525和 331．646，均P0．05)。缺氧条件下HIF1et沉默组中HIF1et、生存素 的 mRNA 和蛋 白分别为 0．604±0．040、0．394±0．018、0．997±0．026、0．172±0．006，明显受到抑制 (mRNA的t值分别为7．809和--28．936，均P0．0l；蛋白的t值分别为 13．523和一14．202，均P 0．叭)；常氧条件下，转染miRNA后 A549细胞增殖 (24h为 O．273±0．008)无明显变化，但迁移 细胞数 (30±6)比未处理组 (121±17)减少；缺氧条件下，转染miRNA后，A549细胞生长速度 (24h为 0．273±0．008)减慢，细胞体外的迁移细胞数 (75±4)减少 (均P0．05)。结论 A549 细胞中生存素核心启动子上存在HIF。la结合位点；miRNA沉默A549细胞HIF—let表达后，可有效 下调生存素基因表达，常氧条件下仅抑制细胞迁移，缺氧条件下不仅促进细胞凋亡，还可抑制细胞 增殖和迁移。 【关键词】 癌，非小细胞肺； 缺氧诱导因子 1，a亚基； 缺氧； 生存素 Effectofhypoxiainduciblefaetor-laonthebiologicalandthetranscriI’tionofsurvivininA549cells ShuHongmeLZhaoChengling,SunYan,LiWei,ChertYuqing．DepartmentofRespirationMe~cine,the FirstAffiliatedHospitalofBengbuMeScalCollege，Bengbu233003，China Correspondingauhtor．ChenYuqing,Email．bbmecyq@126．corn [Abstract] 0bjective Toevaluatetheeffectofhypoxiainduciblefactor-1ct(HIF一1 onthe transcriptionalregulation ofsurvivin and theproliferation，apoptosisandmigrationofA549cel