羊口疮病毒威海株的分离鉴定.pdfVIP

动物医学进展 。2014，35(12)：45-48 ProgressinVeterinaryM edicine 羊 口疮病毒威海株的分离鉴定 高晶晖，张 瑜，侯伟杰，张立强，高 洋，张淼涛 ，陈德坤 (西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100) 摘 要：利用犊牛睾丸原代细胞对山东省威海市某奶山羊养殖场疑似羊1：7疮(Orf)山羊病料进行病毒分 离，通过细胞病变观察、病毒滴度和聚合酶链反应 (PCR)等方法对分离毒株进行鉴定。结果表 明，研磨处理 的病毒液接种于犊牛睾丸原代细胞后盲传至第 5代 出现病变，测得第 6代分离株病毒滴度为 1O·TCID5。／mL。 扩增羊 口疮病毒特异性 B2L基因，发现该毒株与34个羊口疮毒株核苷酸序列 同源性高达 99 ，包括福建株 (KC588399．1、KC568398．1)。本研究成功分离鉴定 了羊 口疮病毒山东威海株。 关键词：羊 口疮病毒；分离鉴定 ；聚合酶链反应 中图分类号：$852．65 文献标识码 ：A 文章编号：1007—5038(2014)12—0045—04 羊 口疮 (Orf)又名羊传染性脓疱 (Contagious 1 材料与方法 ecthyma)，是一种能够严重感染羔羊和母羊 的皮肤 1．1 材料 病 |1]。此病的临床特点有 结痂皮损红斑 ，通常发生 1．1．1 病料 采 自山东省威海市某奶山羊养殖场 在羔羊的鼻 口周 围。且增生性病变一般开始于嘴 具有疑似羊 口疮I临床症状的山羊唇部结痂 。 唇，鼻孔 ，齿龈 ，皮肤交界处 ，有时波及到 内部器 1．1．2 细胞株 采 自杨凌某奶牛场 1El龄新生犊 官r2]。局部病变由脓疱变为结痂。结痂通常在 6周 牛睾丸，本实验室制备保存的犊牛睾丸原代细胞 。 ～ 8周得以恢复，但是，有时也会引起继发感染[3]。 1．1．3 主要试剂 M199细胞培养基 、2．5g／L胰 羊 口疮是 由羊 口疮病毒(Orfvirus，ORFV)引起，羊 酶、犊牛血清和二 甲基亚砜 (DMSO)均由Gibco公 口疮病毒属于痘病毒科副痘病毒属[5]。通常病毒不 司提供 ；青霉素、链霉素、氯化钠 、氯化钾等为进 口分 会出现由发病点系统性 的传播 ，相反 ，是由结痂病料 析纯；PBS缓冲液、碳酸盐缓冲液；PCR相关试剂购 引起 的环境污染来传播病毒 ]。羊 口疮在 国外普遍 自TaKaRa公司。 存在 ，在我国陕西、甘肃 、云南、青海、新疆和山东等 1．1．4 主要仪器 恒温培养箱 (Thermo)，高速低 山羊养殖地区也均有本病的报道 [7]。此病 的发病率 温离心机 (Eppendorf)，电子天平 (SHMADZU)，恒 高 ，病死率低 ，通常情况下，小羊和羔羊的病死率高 。 温循环水浴锅 ，一80℃低温冰箱 (SANYO)，超净工 羊 口疮的病死率虽然低于 1 ，考虑到动物年龄与 作台，光学显微镜 (OLYMPUS)，PCR仪 (TaKa— 体质 的影响，在二次感染后病死率会提高到约 20 ～ 5O [8]