分枝杆菌降解甾醇发酵生产雄烯二酮的两相系统培养基优化.pdfVIP

386 2007, Vol. 28, No. 11 食品科学 ※生物工程 分枝杆菌降解甾醇发酵生产雄烯二酮的 两相系统培养基优化 1 1 1,2 1 1 姜绍通 ，胡锦艳 ，杨 英 ，赵俊平 ，崔福强 1.合肥工业大学生物与食品工程学院，安徽 合肥 ；座机电话号码.安徽建筑工业学院环境工程系，安徽 合肥 230022 摘 要：对分枝杆菌Mycobacterium sp. BD696-6降解甾醇发酵生产雄烯二酮 AD 的两相系统培养基进行了优化。 在甾醇添加量为0.6%时，培养基组成为有机相葵花油浓度20%、碳源糖蜜6%、氮源NH4NO3 0.3%、磷酸盐 NH4 2HPO4 0.08%条件下，AD得率最高，达到78.6%，比原培养基条件下得率提高了17.0%。 关键词：雄烯二酮；甾醇；两相系统；培养基优化 byMycobacterium sp. in Two-phase Systems 1 1 1,2 1 1 JIANG Shao-tong，HU Jin-yan，YANG Ying， ZHAO Jun-ping，CUI Fu-qiang ； Abstract：The two-phase system medium forMycobacterium sp degrading 4NO3 0.3%, NH4 2HPO4 Key words：Mycobacterium sp.；sterols；two-phase system；medium optimization 中图分类号：Q939.97 文献标识码：A 文章编号： 的葵花油为有机相溶剂，大大提高了甾体底物的投料 雄烯二酮 雄甾-4-烯-3,17-二酮，androst-4-ene-3, 17-dione，简称AD 是制备甾体激素类药物的重要中间 量。本实验主要研究了水相培养基主要成分与浓度对发 [1] [2] 酵的影响，通过培养基优化，使菌种转化能力达到最 体 。传统的AD制备方法属于皂甙元途径 ，工艺复 杂、成本高，且污染环境。而微生物选择性切除甾醇 大，提高了AD的产率。 [3-4] 边链生产AD 具有产品纯度高、生产成本低、周期短 1 材料与方法 等特点，因此微生物发酵技术生产AD是代替传统生产 方法的一大趋势。 1.1材料 微生物法生产AD主要受甾醇在水中溶解度低的限 分枝杆菌 Mycobacterium sp.BD696-6 合肥工业大 [5] 制。传统的单水相发酵多采用添加少量有机溶剂 、表 学生物与食品工程学院保藏。 [6] 面活性剂 的方法来提高甾醇在发酵液中的浓度，但效 菜籽甾醇 合肥工业大学生物与食品工程学院精 [7] 果并不理想。近些年来，两液相培养系统 、双水相 制，甾醇含量高于95%；其它试剂均为市售分析纯 [8] [9] 系统 、浊点系统 的应用，不仅增大了甾醇溶解度， 试剂。 提高了底物的投料量，而且将细胞培养与产物萃取分离 斜面培养基 % ：葡萄糖1、甘油2、硝酸铵0.2、 耦合，减少了代谢产物的反馈作用。 K2HPO4 0.05、琼脂1.5；液体种子培养基 g/L ：玉米 本研究以两液相培养系统作为微生物转化的发酵系 淀粉6，NH4NO3 0.25，K2HPO4 0.12，泡敌 0.007， [10] 统，选择甾醇溶解度高、对微生物细胞毒性作用 较低 pH7.5，20ml培养基/100ml三角瓶；发酵转化培养基 收稿日期：2007-09-05 基金项目：国家“十一五”科技支撑计划项目 2006BAD05A12 ；安徽省自然科学基金项目 0座机电话号码X 作者简介：姜妱通 1954- ，男，教授，主要从事农产品生物化工方面的研究。 ※生物工程 食品科学 2007, Vol. 28, No. 11 38 7 % ：有机相为葵花油16，甾醇0.6，水相为玉米淀粉 过高又会阻碍溶氧。实验结果表明，葵花油的最适宜浓 6，NH4NO3 0.25，K2HPO4 0.12，泡敌0.007，pH7.5， 度为20%。此时，AD产量达到2.515g/L，得率为66.14%。 50ml培养基/250ml三角瓶。 2.2不同碳源及碳源浓度对AD产率的影响 1.2培养条件 2.2.1不同碳源种类对AD产率的影响 斜面培养：30～32℃培养5d。 分别选取葡萄糖﹑果糖﹑玉米淀粉﹑糖蜜﹑甘油为 液体种子培养：取一环在斜面培养基上培养5d的 碳源，考察碳源种类对AD产率的影响，结果见图2。 菌体，接种至液体种子培养基中，置于130r/min旋转 式摇床上，30～32℃培养66h。 100 3.5 发酵转化培养：液体种子培养66h后，以接种量 80 3.0 A 10%接入发酵培养基，置于250r/min旋转式摇床上，