第六章核酸类药物.ppt

5．碱水解法生产2 、3 -混合核苷酸。 用酶法降解RNA得到的是5’-核苷酸，可用于生产呈味核苷酸。 2’、3’ -混合核苷酸在医药上有它的特殊用途。对血小板减少，白血球减少症和癌症化疗后升白血球均有较好疗效。 用碱水解RNA 可产生2’、3’ -混合核苷酸。实际上，是由于稀碱水解过程中，先形成一个中间环状物2’、3’ –环状核苷酸，它很不稳定，进一步水解生成2’，3’ –核苷酸。 （三）发酵法生产肌苷酸 IMP生成总反应过程 肌苷酸的应用 国内生产企业 一步法（发酵法） 1.肌苷酸生产菌选育 （1）解除微生物自身的反馈调节 a.解除AMP、GMP对PRPP转酰胺酶的反馈抑制。 b.切断5‘-IMP继续代谢生成GMP和AMP的途径。 因此，选择可能产生核苷酸的产氨短杆菌（Brevibacterium ammoniagene）为出发菌株，诱变为腺嘌呤缺陷型突变株，再诱变为鸟嘌呤缺陷型突变株。 IMP的阻遏如何解决？ （2）改变核苷酸对细胞膜的渗透性 核苷或碱基容易透过细胞膜，而核苷酸难于透过细胞膜。 日本科学家发现，Mn2+对于产氨短杆菌核苷酸的膜透性起着关键作用， Mn2+限量的情况下，菌体产生膨胀异常现象，细胞膜允许IMP渗透到胞外，积累IMP。 Mn2+限量与生物素亚适量结果相同，但机制不同。 Mn2+亚适量：培养后期，细胞形态异常（伸长、膨胀、不规则） 生物素亚适量：为乙酰CoA羧化酶的辅基，影响脂肪酸生物合成，间接影响细胞膜磷脂合成，从而影响细胞膜透性。 发酵法生产肌苷 工艺要点： 1、菌株选育：变异芽孢杆菌 2、一级种子培养 葡萄糖2％，蛋白胨1％，酵母浸膏1％，玉米浆0.5％ 尿素0.5％，氯化钠0.25％ ；pH值7 温度：32度左右，转速100r/min，18h 3、二级种子培养（50L发酵罐，定容25L） 培养基：一级种子培养基 接种量：3％ 温度：32度左右 ，转速320r/min，12～15h 通风量：1：0.25V/(V.min) 菌体浓度：OD650nm＝0.78 4、发酵（50L发酵罐，定容35L） 培养基：淀粉水解糖10％，干酵母水解液1.5％， 豆饼水解液0.5％，硫酸镁0.1％，氯化钾0.2％， 磷酸氢二钠0.5％，尿素0.4％，硫酸铵1.5％， 消泡剂0.5mL/L，pH7 接种量：0.9％ 温度：32度左右 ，转速320r/min，93h 通风量：1：0. 5V/(V.min) 5、提取精制 工艺讨论： 1、发酵液采用葡萄糖，产品质量最好；培养基中要 保证充足氮源，最好用氨气。 2、提取工艺改进 直接上柱 3、温度对提取的影响 冬夏低春秋高，32度放置15h后进行洗脱，收率降 10％，48h后洗脱，收率降30％左右；室温20度放置 48h后洗脱，收率降低5％左右。 （四）叠氮胸苷（AZT） 商品名：Refrovir，中文商品名齐多夫定。是第一种被美国FDA批准用于临床的治疗艾滋病的新药。 药理作用：在体内经磷酸化后生成叠氮胸苷酸，取代了正常的胸嘧啶核苷酸（TMP）参与病毒DNA合成，而含AZT成分的DNA不能继续复制，从而阻止病毒增殖。 （一）叠氮胸苷（AZT） 化学合成，起始原料是胸苷，成本高。 （一）叠氮胸苷（AZT） AZT的常见付作用为贫血、白血球减少，有32%的患者服药后引起骨髓坏死症，破坏人体造血功能。 1990年5月《新英格兰医学杂志》发表了第2个治疗爱滋病的药物，称双脱氧肌苷（DDI），商品名称Videx，由美国国立癌症研究所于1985年发现的。 （一）叠氮胸苷（AZT） DDI的化学结构和药理活性与AZT相似，治疗艾滋病的效果与AZT相同。 DDI的抗病毒作用，是通过减慢HIV在人体细胞中的复制（或繁殖）速度和在免疫系统中的扩散（或传播）速度。DDI的治疗效果比AZT好，极少发现毒性反应，大剂量给药时，发生外周神经痛和胰腺炎。 （一）叠氮胸苷（AZT） 后来，美国又批准一个治疗艾滋病的新药，称为双脱氧胸苷（DDS），是HIV复制的抑制剂，可代替AZT。 在体内，通过细胞酶的作用，转化成有抗病毒活性的双脱氧三磷酸腺苷（ddATP），干扰逆转录酶而阻止HIV的复制。 临床验证，DDS使CD4细胞数目增多，延长生存时间，减少致病菌感染的发病率，可作为抗HIV的首选药物。 * * * * “珍奥核酸”的争论 1998年4月，大连珍奥核酸科技发展有限公司在大连开发区建成一期工程。 珍奥核酸说明书摘录 增强基因自我修复能力，显著改善脑机能，促进新陈代谢及细胞分裂，提高免疫力，美容养颜润肤。核酸具有抗病毒，抑肿瘤，抗衰老，健脑益智的功效。在临床实验中，令