毛细管电泳在蛋白质等生物大分子分析中地应用.pdfVIP

14 现代医学仪器与应用 毛细管电泳在蛋白质等生物大分子分析中的应用 阮小林 谢天尧 莫金垣 摘要毛细管电泳作为一种高效分离技术近年来取得了飞跃进展。本文综述了该技术在蛋白质、 肽、DNA等生物大分子的分离分析中的应用，同时也评述了与它联用的各种检测手段及特点。 关键词毛细管电泳；生物大分子；分离分析 毛细管电泳(CE)又称为高效毛细管电泳度高，专属性强，能提供分子结构信息，CE．MS (HPCE)，是分析化学研究领域近年来发展得 联用，为生物大分子的分析带来了强有力的分 最快的新技术之一。1979年Mikkers等首次采辨率，可对纳升级的样品进行分子结构分析和 分子量的准确测定。其他如电化学检测技术等 用200¨mPl肛毛细管以区带电泳方式分离了 与CE联用发展也很快，现将报导作一综述。 16种有机酸。1981年Jorgenson等进一步用 751am毛细管进行区带电泳分离丹酰化氨基酸 一、毛细管电泳的各种分离模式从混合 时，发现柱效与电场强度成正比，与分子的扩 样品中分离蛋白质和肽一直是分析工作者的研 散系数成反比，这一结论立即使人们意识到CE 究重点。虽然色谱法可以分离从数克到数微克 将会给生物大分子的分离、分析带来深刻的变 不等的样品，但CE技术更适合分析更少量的聚 化。短短的几年内，由于CE符合了以生物工程 肽及大分子蛋白质。如用CE／MS系统可分离分 为代表的生命科学各领域中对生物大分子(肽、 析10。3mol到10d’mol的肽。 蛋白、DNA等)的高度分离分析要求，得到了 迅速发展，正逐步成为生命科学及分析学科等 基于各组分的荷质比不同丽进行的，迄今它仍 实验室中一种常用的分析手段。CE在生物大分 子蛋白和肽的应用可概括为两大方面：一是其 结构的表征，二是研究相互作用。蛋白质一级 硝基谷胱甘肽可与还原及氧化的谷胱甘肽分离 结构表征的内容包括纯度、含量、等电点、分 并定量测定。李克等【4J研究了CZE分离人血清 子量、肽谱、氨基酸序列和N．端序列的测定等。 蛋白质的电泳行为，并建立了分离血清蛋白质 CE已广泛用作最有效的纯度检测手段，它可检 测出多肽链上单个氨基酸的差异。尤其是肽谱 80 用CFJMS联用进行分析，可推断蛋白质的分子含PEG 结构。蛋白质结构的完全表征尚需采用多种CE 成对血清样品的分离。肽及蛋白质的水解产物 模式，结合多种仪器联用，特别是和MS、 TOF／MS的联用，才能得到正确的结果。蛋白，液(含SDS 特别是基因工程所得蛋白药物的微不均一性是 影响其质量的因素之一，所以蛋白质和DNA始 的18种氨基酸，若以50岫l的毛细管，所需的 终是CE研究的重点。国内，中科院化学所竺安 教授率先开展CE的研究，迄今已有几百个单位 敏度更高。 进行CE的研究和应用u’2】；国外，已开发出了 该模式常以电解质水溶液为介质，根据具 不同型号的商品化毛细管电泳仪。质谱因灵敏 体情况可加入不同的有机溶剂或其他添加剂。 在磷酸盐及硼酸盐中添加两性离子(如 作者单位：510275中山大学化学与化学工程学院 万方数据 2002年第14卷第4期 15 精胺)均可改善CZE对蛋白质的分离效率。用可减少电渗流，对于碱性蛋白质，分离效率可 传统的醋酸纤维电泳(CAE)或CZE难以分离提高1000倍，而涂层不易损失。用聚丙烯酰胺 单克隆体蛋白，这可能是由于方法没足够的灵 敏度，可通过加长毛细管，在缓冲液(pH=10．0)了14种核苷酸分离。将聚乙二醇和聚乙烯二醇