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有机阴离子转运蛋白在马兜铃酸肾病发生中的关键作用 薛翔，宫丽崑，栾洋，肖瑛，戚新明，李妍，武元峰，邢国振，陈敏，任进* 中国科学院上海药物研究所药物安全与评价研究中心 上海，201203 摘要 马兜铃酸（Aristolochic acid, AA ）是一大类结构类似的硝基菲羧酸，其主要成 分是马兜铃酸 I （AAI ）。AA 是已知的对多种动物种属包括人均肾毒性和致癌性 的化合物，特征是引起肾间质纤维化和上尿道癌。有体外实验研究提示肾小管上 皮细胞中的有机阴离子转运蛋白（Organic anion transporter, OAT ）可能在AAI 被特异性摄取进入肾小管上皮细胞的过程中起作用。然而，在体内复杂环境中， OAT 是否确实在 AA 的特异性摄取及其肾毒性发生中起作用尚缺乏实验依据。 本实验研究发现，联合给予小鼠已知 OAT 抑制剂丙磺舒（Probenecid ，PRB ）和 AAI ，可以延缓AAI 从血中清除，降低肾脏浓度和升高肝脏浓度，最终减轻 AAI 所致的肾毒性，同时并无肝毒性的发生。进一步研究发现，AAI 在 Oat1 和 Oat3 基因敲除小鼠产生的肾毒性均要明显轻于其野生型。以上结果表明，OAT1 和 OAT3 均在特异性跨肾小管上皮细胞转运 AAI 过程以及 AAI 肾毒性的发生中起 着重要作用，这可能是一个新的潜在的马兜铃酸肾病的防治靶点。 关键词：马兜铃酸，有机阴离子转运蛋白，肾毒性 *通讯作者 1. 前言 我们以及其他一些研究已经表明错误！未找到引用源。，马兜铃酸 （Aristolochic acid, AA ）在机体内主要通过两种途径进行代谢和活化，1）由P450 介导去甲基氧化反应生成低毒的 AAIa ，再与葡萄糖醛酸或磺酸结合后排泄；2 ） 由细胞内硝基还原酶如NQO1 ，XO ，CYP1A1 和 CYP1A2 介导的还原反应生成 活性中间体氮翁离子，与 DNA 或蛋白反应引起基因突变或者引发肿瘤。这些活 化反应主要发生在肝脏和肾脏，引起肾脏毒性和在啮齿类动物中引起前胃癌。研 究者在 AA 的代谢途径解析中取得了很多进展错误！未找到引用源。，然而 AA 如何被肾脏细胞摄取，从而导致特异性肾毒性机制尚不清楚。目前仅有体外实验 研究表明错误！未找到引用源。，肾小管上皮细胞有机阴离子转运蛋白（Organic anion transporter, OAT ）可能在AAI 被摄取进入肾小管上皮细胞的过程中起重要 作用。然而，AA 在体内的转运机制及 OAT 是否确实在其肾毒性发生中起作用 尚缺乏实验依据。本实验中我们使用已知的 OAT 抑制剂及基因敲除小鼠等体内 实验，证实了 OAT 在 AAI 的跨肾小管上皮细胞转运过程以及AAI 肾毒性的发生 中起着重要作用。 2. 材料与方法 2.1 试剂 丙磺舒（Probenecid ，PRB ），AAI 均购自 Sigma-Aldrich （St. Louis, USA ）. 2.2 动物实验 8-10 周龄雄性 C57BL/6 小鼠购自上海实验动物中心 (Shanghai, China) 。动 物分为 4 组：（1）AAI 组小鼠单次经腹腔给予溶于生理盐水中的 AAI 10mg/kg ； 以前实验已证实该剂量可在雄性 C57BL/6 小鼠引起肾毒性；（2 ）PRB+AAI 组 小鼠在给予 AAI 30min 前经腹腔给予溶于 pH 调为 7.4 的生理盐水中的 PRB 150mg/kg；该剂量为报道的可以抑制 OAT 功能的剂量；（3 ）PRB 组小鼠给予 生理盐水 30min 前给予 PRB150mg/kg ；（4 ）溶剂对照组：小鼠仅给予两次生理 盐水对照。 8-10 周龄雄性 Oat1 基因敲除小鼠维持于 Charles River Laboratories International, Inc. (Yokohama, Japan) 。8-10 周龄雄性 Oat3 基因敲除小鼠维持于 Oriental Yeast Co., Ltd. (Tokyo, Japan) 。两种动物各分别设置4 组：（1）野生型 对照组(WT control)小鼠单次经腹腔给予生理盐