端粒和端粒酶是如何保护染色体的.pptVIP

2009年诺奖工作回顾——端粒和端粒酶是如何保护染色体的 ——2009年诺贝尔生理学或医学奖 Elizabeth H. Blackburn Carol W. Greider Jack W. Szostak The Nobel Prize in Physiology or Medicine 2009 was awarded jointly to Elizabeth H. Blackburn, Carol W. Greider and Jack W. Szostak “for the discovery of how chromosomes are protected by telomeres（端粒） and the enzyme telomerase（端粒酶）”. 内容提要 端粒问题的提出 Blackburn与Szostak发现端粒能保护染色体末端 Blackburn与Greider发现催化端粒延伸的端粒酶 研究进展及发展方向 工作的重大价值 端粒问题的提出 20世纪30年代，Hermann J．Muller(1946年诺贝尔生理学或医学奖)发现被X射线打断的果蝇染色体其末端存在一种特殊序列，该序列与常染色体相较极不稳定。1938年，Muller在The Collecting Net上发表了一篇题为“The remarking of Chromosomes”的演讲稿，将染色体的游离端命名为端粒（telomer）。 “这种末端基因具有某种特殊的功能，即可以对染色体的末端起到封闭(sealing)的作用，从某种意义上讲，如果染色体的末端不被封闭，染色体就不会持续存在”。 ——Muller HJ. The remarking of chromosomes. Collecting Net, 1938, 13: 181-198. 端粒问题一 1941年，Muller的结论由Barbara McClintock(1983年诺贝尔生理学或医学奖)在玉米中得到证实。 染色体末端不同于DNA断端，它避免之间发生融合的特殊结构是什么？ 端粒问题二 1972年，James Watson(1962年诺贝尔生理学或医学奖)在探讨噬菌体T7的DNA复制时指出，真核生物线性DNA的复制始于内部起始点，以短链RNA分子作引物，沿5’→3’方向延伸互补链。 真核生物线性DNA末端可以完整复制的机制是什么? Npg.Nature.vol.350.issue.6319.Apr.1991 前导链 随从链 引物 Blackburn与Szostak发现端粒能保护染色体末端 1975年，Blackburn检测嗜热四膜虫编码核糖体RNA的线性rDNA端粒序列 由核苷酸六聚体(CCCCAA/GGGGTT)n构成，n=20~70 重复序列具有方向性，端粒的3’端由(TTGGGG)n 构成(G链)，5’端由(CCCCAA)n构成(C链) 重复序列具有不连续性 70s，Szostak在酵母中构建人工线性DNA分子研究染色体同源重组机制 用限制性内切酶酶切环形质粒时，存在“黏”性末端，酶切后形成的线性DNA分子很快与酵母的染色体DNA发生同源重组，或很快被降解而不能长时间稳定存在 DNA sequences of telomeres maintained in yeast，Nature.Vol.310. 12 July 1984 热四膜虫rDNA一个长1．5kb、含有端粒的末端片段，连接到酵母环状质粒酶切后形成的线性分子两端，构成一个全新的线性DNA分子。 Blackburn与Greider发现催化端粒延伸的端粒酶 Blackburn和Szostak的实验证实了端粒在物种进化中的保守性以及其保护染色体稳定性的重要功能。 ———端粒的复制问题？ 科学家们试图用多种模型来解释，包括同源重组或转座作用、回文结构或发卡结构等，也有科学家设想存在一种全新的酶催化合成端粒。 1984年，Greider在Blackburn的指导下共同研究端粒的复制问题。 ——设想 存在一种特殊类型的转移酶能沿3’→5’方向先将G链延长，再以此为模板合成互补的C链，这样就保证了子代DNA链5’端的完整性。 她们用一段合成的端粒作为底物，加入嗜热四膜虫的无细胞浸出物中，并混合了α-32P-dGTP、dATP、dTTP、dCTP，孵育一段时间后将产物进行凝胶电泳分析。 Identification of a Specific Telomere Terminal Transferase Activity in Tetrahymena Extracts Cell, Volume 43, 405-413, 1 December 1985 结果发现，DNA寡聚体的延