氨基酸分子改性的SiO2杂化材料用于胰蛋白酶固定化.pdfVIP

V01．32 高等学校化学学报 No．5 2011年5月 CHEMICALJOURNAl．OFCHINESEUNIVERSmES 1100一1105 氨基酸分子改性的Si02杂化材料 用于胰蛋白酶固定化 李 晔，张恒建，廖明霞，刘 涛 (北京科技大学化学与生物工程学院化学系，北京100083) 摘要为改善二氧化硅载体材料本身的生物相容性和疏水性，维持包埋生物分子的活性，对水解前驱体 3．氨基丙基三甲氧基硅烷进行了氨基酸分子改性．采用N．Fmoc-L-缬氨酸和氯化亚砜反应生成N-Fmoc-L一缬 氨酰氯，再与3．氨基丙基三甲氧摹硅烷反应生成N-(3-三甲氧基硅基)丙基．Ⅳ-Fmoc-L-缬氨酰胺．然后去除 H Fmoc。得到N．(3．三甲氧基硅基)丙基．￡．缬氨酰胺．通过IR。MS和1NMR等分析手段对合成化合物的结 构进行了表征．以正硅酸甲酯(TMOS)和^L(3-三甲氧基硅基)丙基-厶缬氨酰胺为复合硅源，经过溶胶·凝胶 法包埋胰蛋白酶，当』v．(3．三甲氧基硅基)丙基-￡-缬氨酰胺的摩尔分数为15％时，固定化胰蛋白酶活力的绝 u． 对值为199U，游离酶的酶活力绝对值为103U，而四甲氧基硅烷直接包埋的固定化酶活力的活性仅为38 由杂化硅源得到的固定化酶的活性是以四甲氧基硅烷为水解前驱体的固定化酶活性的5倍．杂化硅源固定 化胰蛋白酶比游离酶的最高活力提高近2倍．结果表明，氨基酸分子经水解前驱体修饰后，水解产生的固定 化载体具有良好的生物相容性．通过改性载体制备的固定化酶对甲醇变性剂的稳定性、酸碱的抵抗性及热 稳定性均有明显提高． 关键词二氧化硅杂化材料；酶活力；氨基酸；胰蛋白酶 文献标识码A 105-1100-06 中图分类号0629；0644 文章编号025l-0790(201l 利用二氧化硅溶胶．凝胶法进行生物分子固定化一直是一个非常活跃的研究领域¨。J．通常使用 硅酸脂类化合物作为前驱体分子，在酸催化的条件下水解产生硅烷醇基团(Si—OH)，这些硅烷醇进一 步发生缩合反应形成硅氧烷聚合物，从而产生一种胶态悬浮液体(即溶胶)，陈化后很快变为凝胶．通 过这种溶胶一凝胶技术可将许多生物分子如蛋白质H】、酶”1和DNA∞J，甚至完整的细胞1包埋到二氧 化硅凝胶中．然而，与其它的生物固定化方法一样，生物分子包埋后，其生物活性下降甚至丧失是一 个普遍存在的问题旧】．例如，乳酸酶一】、羟基乙酸酶¨训和萤火虫荧光素酶¨¨等生物分子包埋后生物 活性完全丧失．原因可能是：(1)前驱体分子在水解过程中产生大量的有机溶剂(醇)，从而引起生物 分子变性；(2)二氧化硅凝胶形成过程和形成以后老化过程中的模板效应，使得生物分子完全被束缚 从而限制其内部运动使之不能执行特定功能‘12]；(3)被包埋的生物分子完全被载体材料内部的众多 si—0键所包围，形成一个不适宜酶生存的微环境． 通过化学反应对硅酸脂前驱体进行化学修饰，改变酶与凝胶基质间的相互作用，制备生物适应性 良好的二氧化硅凝胶杂化材料是一个可行的方案．目前主要是通过引入有机基团来制备二氧化硅有 柳／无机杂化材料，这不但能增加材料本身的疏水性，而且还可以改善材料本身的生物适应性¨3’H1． Gill等¨纠报道了使用甘油对水解前体进行化学修饰．Brennan等¨酬报道了将糖分子和硅酸甲酯硅共价 结合后，水解前体可以显著地提高生物相容性．Bhatia等Ⅲo则通过使用模数为3．25的水玻璃水解制 备了二氧化硅凝胶，优点是水解过程不产生醇，但需要在pH=2的强酸性条件下进行，显然这种苛刻 的环境对于大多数生物分子不利．Ferrer等¨引报道了采用特殊的真空干燥的方法也可以制备得到完全 不含醇的二氧化硅凝胶． 收稿日期：2010-10·12． 基金项目：国家自然科学基金(批准号：206730