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哈维氏弧菌硫氧还蛋白还原酶在大肠杆菌中的表达及对大 菱鲆免疫保护作用 摘要 哈维氏弧菌(Fibrio harveyi)是一种革兰氏阴性的海洋细菌，广泛分布于海洋 环境及海洋生物，能引起海水鱼类及其它养殖动物发病，是世界上许多国家和地 区养殖对虾和鱼类的致病菌，也是我国海产经济鱼类弧菌病的主要病原菌之一， 给海水养殖业造成了巨大的经济损失。哈维氏弧菌的胞外蛋白酶、磷酯酶、溶血 素、III型分泌系统、密度感应系统等与其致病性密切相关。目前国内对细菌病防 治仍然主要靠化学药物及抗生素，由此带来的环境污染、药物残留及细菌耐药性 现象日益明显。疫苗防治方法由于安全无污染，是未来疾病防治的首选措施。 微生物常遇到环境中较多的活性氧自由基的损害。硫氧还蛋白系统包括硫氧 化物还原酶系统，广泛地存在于真核生物和原核生物中。硫氧还蛋白系统与体内 细胞氧化还原反应、核酸代谢、细胞生长密切相关。其中，硫氧还蛋白还原酶 (thioredoxin 酶。主要功能是催化NADPH将小分子蛋白硫氧还蛋白上的二硫键(．S．S)还原 成(．SH)2的反应，维持Trx的还原型，可以维持细胞自由基产生和清除之间的平 一 衡，在微生物适应环境及细菌致病性方面发挥重要作用。 本文从致病性哈维氏弧菌(1／ibrio 白还原酶基因的1133 bp目的片段，连接至载体pMDl9-TSimple，测序结果表明， 目的片段含有960 bp的硫氧还蛋白还原酶基因阅读框，编码319个氨基酸残基 的蛋白质。BLAST分析显示氨基酸序列与哈维氏弧菌、溶藻胶弧菌、副溶血弧 菌、灿烂弧菌、弗氏弧菌的硫氧还蛋白还原酶蛋白序列相似性为分别为99％、 转化至大肠杆菌但colO 分子量为34kDa。用Ni琼脂糖亲和柱分离得到纯化的重组蛋白，将该蛋白以 效价。结果表明，1_4周内特异性抗体效价持续升高，达到10927．0。免疫4周后 用哈维氏弧菌SFI进行人工感染，对照组的死亡率为100％，免疫组的死亡率为 25％，免疫保护率为75％。表明哈维氏弧菌TrxR蛋白具有良好的免疫原性，可 作为亚单位疫苗用于哈维氏弧菌病的免疫预防。 关键词：哈维氏弧菌；硫氧还蛋白还原酶；克隆；大菱鲆；免疫原性 6 and Expression ofthioredoxin immunogenicityanalysis reductase ofHbrio SFl on harveyi Abstract Vibrio isa rod harveyihalophilic，Gram negativecomma．shapedbacterium，which causes lethal vibriosis，a a offish hemorrhagicsepticemiaaffectingvariety and species other economic aquaticanimals，causing losses the