猪细小病毒病—猪圆环病毒病二联灭活疫苗及研究.pdfVIP

IIIIII I lUlII1 111 1 1111III 本论文受到下述项目资助： 河南农业大学禽病研究所与辽宁益康生物股份有限公司合作项 目。 目 录 中文摘要…………………………………………………………………………………………1 文献综述…………………………………………………………………………………………3 试验一猪圆环病毒2型灭活疫苗种毒株的筛选……………………………………………12 引言………………………………………………………………………………………………12 1．材料与方法……………………………………………………………………………………12 2．结果……………………………………………………………………………………………14 3．讨论……………………………………………………………………………………………18 试验二猪圆环病毒2型HNTP和HNYY株免疫效力试验………………………………20 引言………………………………………………………………………………………………20 1．材料与方法……………………………………………………………………………………20 2．结果……………………………………………………………………………………………22 3．讨 仑……………………………………………………………………………………………23 试验三猪圆环病毒2型在转管：悬浮微载体培养PK．15细胞中的繁殖动态………………25 弓i一言………………………………………………………………………………………………25 1．材料与方法……………………………………………………………………………………25 2．结果……………………………………………………………………………………………27 3．讨论……………………………………………………………………………………………29 试验四猪细小病毒一猪圆环病毒2型病二联灭活疫苗的研究………………………………31 引言………………………………………………………………………………………………32 1．材料与方法……………………………………………………………………………………32 2．结果……………………………………………………………………………………………38 3．讨论…．．．．O O…………………………………………………………………………………41 参考文献…………………………………………………………………………………………43 英文摘要…………………………………………………………………………………………50 皿直丛些太堂2Q13届盟宜生望些途塞 摘要 circovirus 猪细小病毒病 Porcineparvovirusdisease 和猪圆环病毒病 Porcinedisease 均是危害世界养猪业的重大疫病，分别是由猪细小病毒 Porcine parvovirus，PPV 和猪圆环 circovirus 病毒2型 Porcine type2,PCV2 感染引起的，这两种疾病广泛存在于世界各地并在 大多数种猪场流行，严重影响着养猪业的发展。目前，疫苗接种是有效防控这两种重要传染 病的主要措施，但是仅用单苗费时费力、应激大，存在免疫漏洞，人们迫切需要“一针防 两病”的高效二联灭活疫苗，鉴于此，本研究经过免疫原性试验、免疫保护性试验等最终筛 选出1株PCV2疫苗候选株。为了克服PCV2体外繁殖能力差，增殖滴度低的缺点，并初步 探讨利用转管微载体培养PK．15细胞生产PCV2，在此基础上联合实验室前期已经筛选到的 PPV疫苗候选株HNZK株成功制各出猪细小病毒病和猪圆环病毒病二联灭活疫苗，主要研 究内容如下： 1、为筛选出满足PCV2灭活疫苗制苗要求的毒株，选择本实验室分离保存的8株PCV2 分离株进行免疫原性分析。结果显示，8株PCV2分离株中HNTP和HNYY分离株病毒培 养原液制备的灭活疫苗免疫小鼠后诱导产生的抗体水平较高，二免后一周抗体水平即高丁． 1：800，达到PCV2灭活疫卣的国家质量标准要求，三周时达到峰值l：3200，比对照商品疫 苗诱导产生的抗体水平 1：1600 更高；其分别稀释130倍和463倍后制备的疫苗诱导产生 的抗体水平在二免后三周也能达到1：800。由以上结果可知，PCV2HNTP和HNYY分离株 毒价高，免疫效力良好，是理想的疫苗候选株。本研究丰富了PCV2灭活疫曲毒株的种毒资 源，为研制高质量的PCV2疫苗奠定了基础。 二免四周后的小鼠分别攻不同剂量的PCV2，通过临床症状观察和小鼠组织中病毒载量检 测，来评价本研究所制备疫曲对不同剂量攻毒的保护作j_ j。结果显示，免疫组小鼠组织中各 攻毒组中均