肾安提取液对糖尿病肾病小鼠肾脏保护作用及TGF-β1表达与信号转导的影响.pdf

摘 要 本课题以成功建立糖尿病肾病(DN)小鼠为动物模型，从血、尿生化 学、肾脏病理组织学、分子生物学等方面对肾安提取液进行研究，旨在探 讨肾安提取液防治DN的作用及可能机制。 实验一，目的：建立DN小鼠动物模型。方法：以C57BL／6小鼠为研 (Scr)及肾组织光镜、透射电镜下的病理变化。结果：与正常对照组比 较，模型组小鼠体重明显下降(P0．01)，第3天即开始血糖持续性升高 明显升高(Po．01)，光镜下显示，肾小球肥大，系膜区增宽，基质增多， 小鼠DN模型。 实验二，目的：探讨肾安提取液对DN小鼠生化指标的影响。方法： 将C57BL／6小鼠随机分为正常对照组、模型组、厄贝沙坦组、肾安低、中、 高剂量组(各9只)，各药物干预组分别给予厄贝沙坦10mg／kg、肾安提 取液(由黄芪甲苷、淫羊藿苷和1，8二羟基葸醌组成)2．272mg／kg、 果：与正常对照组比较，其余各组小鼠血糖均明显升高(P0．01)，随着 时间延长，各药物干预组血糖无降低，与模型组无差异(P0．05)；与模 型组比较，各药物干预组尿蛋白定量明显减少(P0．01)，肾安高剂量组 与厄贝沙坦组无显著性差异(P0．05)；第4周未，与模型组比较，各药 的保护作用，但无降血糖作用。 实验三，目的：探讨肾安提取液对DN小鼠肾脏组织形态学影响。方 法：分组及给药方法同实验二；采用KW／BW、肾小球硬化指数、纤粘连蛋 差异(P0．05)；光镜下肾安各剂组肾组织病理变化较模型组明显减轻， 球硬化指数与厄贝沙坦组比较无显著差异(P0．05)；肾安各剂量组FN 无显著性差异(P0．05)；电镜下肾安各剂量组超微结构明显改善，各组 厄贝沙坦组无显著差异(P0．05)。结论：肾安提取液能抑制DN小鼠肾 组织FN蛋白表达，改善肾小球肥大，减少ECM积聚，抑制GBM增厚，减 轻足细胞损伤，延缓肾小球硬化。 实验四，目的：探讨肾安提取液对DN小鼠肾脏转录活化蛋白-1(AP-1) 及TGF-DlmRNA及蛋白表达的影响。方法：肾组织标本取材于生化学研究 部分，分组方法相同；采用免疫印迹法检测AP-1蛋白含量、实时荧光定 量PCR检测TGF-plmRNA表达及免疫组化检测TGF-D1蛋白含量。结果： 0．05)；肾安各剂量组TGF-DlmRNA表达及蛋白含量显著低于模型组(P lmRNA表达及蛋白含量无显 0．01)，肾安高剂量组与厄贝沙坦组TGF-D 蛋白和TGF-p1表达。 实验五：目的：探讨肾安提取液对DN小鼠肾皮质p38丝裂原活化的 达的影响。方法：肾组织标本取材于生化学研究部分，分组方法相同；采 Il 用实时荧光定量PCR检测p38MAPKmRNA表达，免疫组化法半定量检测 mRNA 著低于模型组(Po．01)；肾安高剂量组与厄贝沙坦组无显著性差异(P mRNA、 0．05)。结论：肾安提取液能抑制DN小鼠肾组织p38MAPK p-p38MAPK及Smad7蛋白表达。 综上所述，肾安提取液能减少DN小鼠尿蛋白排出，改善DN肾功能， 减轻DN小鼠肾组织病理变化，延缓肾小球硬化，对DN肾损害具有良好的 1 保护作用。其作用机制可能与降低肾组织AP-1蛋白表达，抑制TGF-p 表达与信号转导，从而减少ECM积聚，抑制足细胞的凋亡等有关。 关键词糖尿病肾病；肾安提取液；活化蛋白-1；转化生长因子一D1；p38 丝裂原活化蛋白激酶；Smad7；中医药 Shen、anExtracti onAttenuatesRenaI l andl nhi bi ts njury TGF一131 i onandSi I Transducti on