生长分化因子15(GDF-15)对缺氧诱导血管内皮细胞凋亡、血管新生影响的机制.pdf

生长分化因子15 （GDF-15 ）对缺氧诱导的血管内皮细胞凋亡、血管新生的影响及机制研究 中文摘要 生长分化因子 15 （GDF-15 ）对缺氧诱导的血管内皮细胞 凋亡、血管新生的影响及机制研究 中文摘要 目的目的：： 目的目的：： 观察观察rh-GDF-15干预对缺氧的人源脐静脉内皮细胞 （HUVECs ）凋亡及血管新生 观察观察 的影响，探讨其作用机制 方法方法：： 方法方法：： HUVECs 取自健康的剖宫产产妇分娩后新鲜的婴儿脐带，经分离、培养获得； 通过化学缺氧的方法模拟体内心肌缺血时的组织缺氧环境 ； PCR 法测定需要检测的基因 （mRNA ）, western blot.检测需要检测的蛋白 表达水平， ELISA 法测定 HUVECs 上清液中 GDF-15 因子浓度； 检测在缺氧 （0、2 、6、12、24 、36、48h ）时 HUVECs 细胞中 GDF-15 基因和 蛋白表达水平及细胞上清液中 GDF-15 因子浓度； 观察 rh-GDF-15(0 、10、20 、50ng/ml)预处理对缺氧 24h 时 HUVECs 细胞凋亡的 影响 ； 观察 rh-GDF-15(0 、10、20 、50ng/ml)预处理对 HUVECs 细胞缺氧 24h 时形成管 腔样结构的影响 ； 测定不同浓度 rh-GDF-15(0 、10、20 、50ng/ml)预处理缺氧 24hHUVECs 细胞 Bcl-2 、 p53 蛋白及 VEGF 和 VEGFR2 基因表达水平 ； 测定缺氧不同阶段 （0、2 、6、12、24 、36、48h ）和 rh-GDF-15 （0、50ng/ml ） 预处理条件下 HUVCEs 胞浆中 HIF-1α蛋白表达水平； 分别测定 rh-GDF-15 （50ng/ml ）及 PB 预处理 HUVECs ，在缺氧不同阶段 （0、 12、24 、48h ）细胞浆及细胞核内 HIF-1α蛋白表达水平； 观察常氧及缺氧 24h 状态下 ，PB 、rh-GDF-15 （50ng/ml ）、HIF-1αsiRNA 和 HIF-1αsiRNA+rh-GDF-15 （50ng/ml ）预处理后 HUVECs 在 Matrigel Matrix 上形成管 腔结构的结果 ； I 中文摘要 生长分化因子15 （GDF-15 ）对缺氧诱导的血管内皮细胞凋亡、血管新生的影响及机制研究 检测 HUVECs 缺氧 24h 、rh-GDF-15 （50ng/ml ）和 rh-GDF-15 （50ng/ml ）+ HIF-1αsiRNA 预处理后 VEGF 基因及蛋白及 VEGFR2 蛋白表达水平； 观察 rh-GDF-15 （0、50ng/ml ）干预、缺氧 24h 及常氧条件下 HUVECs 细胞 Sirtl 和 Mdm2 蛋白表达水平；rh-GDF-15 （50ng/ml ）及 nutlin-3 （Mdm2 的特异性拮抗剂） 预处理、HUVECs 在不同缺氧时间点胞浆及胞核内 p53 表达水平 ； 观察 rh-GDF-15 （50ng/ml ）、nutlin-3(10µmol/L （Mdm2 的特异性拮抗剂)及 rh-GDF-15 （50ng/ml ）+nutlin-3 预处理、HUVECs 缺氧 24h 条件下 Mdm2-p53 免疫复 和物、不同缺氧时间点 （0、2 、6、12、24h ）胞浆和胞核内 p53 、缺氧 6h 后 HIF-1α 蛋白和 VEGF 基因表达水平 。 结果结果 结果结果 1、HUVECs 在缺氧 2h 时细胞中 GDF-15 的 mRN