miR-21-4T1细胞的构建及exosome功能的初步的研究.pdfVIP

目 录 中文摘要…………………………………………………………………．．1 英文摘要…………………………………………………………………．．4 研究论文miR．21．4T1细胞的构建及其exosome功能的初步研究 前言…………………………………………………………………．．7日U舌…………………………………………………………………．．，／ 材料与方法…………………………………………………………．．7 结果…………………………………………………………………18 附图…………………………………………………………………．20 讨论…………………………………………………………………．29 结论…………………………………………………………………．31 参考文献……………………………………………………………．32 综述肿瘤生长和转移的新途径一exosome……………………………．34 致谢………………………………………………………………………．50 个人简历…………………………………………………………………．51 中文摘要 摘 要 目的t microRNA，包括乳腺癌，它参与并促进肿瘤的发生、进展。细胞中的 米小泡。肿瘤分泌的exosome可以通过自分泌方式促进肿瘤细胞的生长， 通过旁分泌或者是内分泌方式抑制免疫监视、促进肿瘤细胞的转移，为其 生长和进展提供一个有利的环境。为了进一步探讨miR．21是否会通过释 放的exosome影响肿瘤微环境，进而影响肿瘤细胞的生长、转移，本实验 细胞以及免疫细胞的影响。 方法： 1构建稳定高表达miR．21的4T1细胞株 胞株，通过实时定量PCR验证该稳转株中miR。21的过表达，荧光显微镜 和流式细胞仪检测miR．21．4T1细胞中绿色荧光蛋白表达情况。同时构建 空载体对照scramble．4T1细胞。 2miR．21对4T1生物性状的影响 移实验分别观察miR一21升高后对4T1细胞增殖、迁移能力的影响。 3exosome的制备 并在透射电子显微镜下观察exosome的形态。 4miR-21．4T1细胞分泌的exosome功能研究 中文摘要 用ELISA试剂盒分析其对小鼠腹腔巨噬细胞、小鼠骨髓来源的DC细胞 表面分子MHCII、CD86、CD54表达的影响。 结果： 中miR-21表达水平升高了2．79±O．5411倍。荧光显微镜下发现 到93．58％±0．456、77．06％±0．844。 2 力要高于4T1和scramble-4T1细胞。 磷钨酸负染在透射电子显微镜下观察到直径约在40．100nm的椭圆形颗 粒，中间淡染，边缘深染。 中miR．21表达水平增加了3．49±0．2703倍。 能够促进4T1细胞迁移。 6 阻断剂所影响。 7 泌IL一6、IL一10，减少小鼠骨髓来源树突状细胞表面的MHC11分子表达。 结论： 1过表达的miR．21可以促进4T1细胞的转移能力。 2 水平也会升高。 进它的转移能力。 中文摘要 4肿瘤细胞来源的exosome对巨噬细胞和树突状细胞能够起到免疫抑 制的作用，但是miR．21升高后并没有明显促进这种抑制作用。 腔巨噬细胞；小鼠骨髓来源树突状细胞 英文摘要 ConstructionofmiR-21．4T1cellsandfunctional its studiesof exosomes ABSTRACT ective：microRNA-21(miR-2an roleintumor obj 1)playsimportant