《GC-TOF-MS应用说明》.ppt

GC-TOF/MS应用说明 薛 震 2010.3.15 提 纲 GC-TOF/MS基本原理 样品分析主要过程及送样要求 GC-TOF/MS适用范围 软件使用方法介绍 原理示意图 《色谱质谱联用技术》：盛龙生//苏焕华//郭丹滨 化学工业出版社 TOF/MS（飞行时间-质谱检测器） GC-TOF/MS（气相-飞行时间质谱联用仪） 自动进样器 GC 离子源 分子泵、 电路板 操作系统 GC-MS给出数据是三维的 响应值 保留时间 相对峰强度 质/荷（m/z）比 碎片离子 色谱图 质谱图 利用质量色谱图分开重叠峰 (a)? 总离子流色谱图 (b) 以m/z91所作的质量色谱图 (c) ? 以m/z136所作的质量色谱图 质谱本身对信号有一个二次分离的过程 样品分析的过程  4．数据处理与结果表达（会占用很多时间，也会发现很多新的结果） 1．样品的采集 2．样品的制备 占整个分析时间的2/3 （最值得关心的问题） 上机只占1/10的时间 3．仪器分析 ? 提取? ?浓缩（目标化合物富集）? ?衍生化? 方法的建立最好有文献支持。 每一步操作应该知道原理。 为什么要预处理？ 1.样品检测时的浓度要达到仪器的检测限； 2.排除其它干扰组份，得到目标分析物的信号峰； 3.为保护仪器、延长色谱柱寿命； 4.气相色谱要求分析对象的沸点一般应在350℃以下；? 5.样品预处理拓宽仪器的应用范围。 ? ?从某种意义上说，预处理水平的高低决定仪器使用水平的高低 A. 送 样 要 求 无水: 保护色谱柱，灯丝寿命，降低噪声。 如何做到无水？ 无需衍生化样品： 1. 要避免接触水，甲/乙醇，丙酮等可与水互溶的溶剂； 2. 样品可以经过真空离心干燥除去水（沸点低的样品会有损失）； 3. 进样前用正己烷溶解上样。. 需要衍生化的样品： 1. 样品需经过真空离心干燥除去水，特别水溶性样品； 2. 衍生化试剂要放在专用干燥器中保存，特别是用吡啶必须保持无水； 3. 衍生化后用无水溶剂定容后进样（正己烷）。 送 样 要 求 B. 样品前处理过程中尽量避免接触塑料容器 色谱正己烷—玻璃容器 色谱乙酸乙酯—EP管30min 色谱正己烷—EP管30min 考虑到生物样品的特点给出如下建议： 1. 提取溶剂若是甲醇/水系统可用EP管。 2. 步骤中有除去大部分塑料添加剂的步骤可用EP管。 1. 上机前样品不能用EP管储存，不能用枪头转移。 2. 挥发油等不能用EP管储存，不能用枪头转移。 送 样 要 求 空白对照；具体问题具体分析 溶剂极性由大 小排列顺序： 水>甲醇>乙醇>丙酮>乙酸乙酯>氯仿>无水乙醚>苯>环己烷 不要用EP管, 塑料枪头 样品处理过程尽量使用色谱纯的试剂 分析纯的正己烷中可被检测出一系列烷烃类的杂质峰 烷烃类物质 目标化合物 送 样 要 求 C.样品处理过程中使用色谱纯的溶剂 GC-TOF/MS适用范围 水蒸气蒸馏提出的植物挥发油 共检出201个峰，相似度>800的共38个 1. GC-TOF/MS特长：对复杂样品进行分析 主要原因：1. TOF速度快； 2. 灵敏度高； 3. 先采数据后处理； 4.Chroma TOF软件去卷积功能增加了对复杂物质的识别。 植物挥发油样品 GC-TOF/MS适用范围 植物复杂代谢物检测 植物代谢物共检出398个峰，相似度>800的共40个 有机酸（包括游离脂肪酸）： 1 2 3 4 5 6 7 内标 脂肪酸经正己烷提取，甲酯化衍生，通过GC-TOF/MS 图大致推断出了7种化合物 GC-TOF/MS适用范围 Chroma TOF 软件使用方法介绍 Chroma TOF软件给出数据窗口 色谱图 峰表 质谱图 结构式 目 录 文件 目录和文件区域 GC 色谱方法 MS 质谱方法 数据处理方法 数据储存处 数据 色谱图区域 总离子流图 选择离子流图 分析离子流图 质谱图区域 原始质谱 去卷积后质谱 谱库质谱 定量需要 定量质量 峰面积 峰 表 相似度 保留时间 对应的五个可能结构 结构式