猪传染性胃肠炎病毒河北分离株核衣壳N蛋白基因的克隆与序列分析.pdfVIP

·* · 中国兽药杂志% % % % % % % % % #+ ，)( （- ）：* D @A 张 莉，等% 猪传染性胃肠炎病毒河北分离株 核衣壳! 蛋白基因的克隆与序列分析 # # # 张 莉 ，翁崇鹏 ，毛娅卿 ，傅光华 ，张培君 （$ 北京市农林科学院畜牧兽医研究所，北京% ’( ；# $ 江西农业大学动物科学技术学院，江西南昌% ))*+ ） ［收稿日期］ #* * #% ［文献标识码］,% ［文章编号］# #’ （#+ ）- * *% ［中图分类号］.’+# $ -+( $ - ［摘! 要］! 采用/0123/ 技术扩增了0456 河北分离株的! 基因，长度约为 *( 78 。将该基 因片段进行亚克隆重组到89:’10 质粒载体上，连接转化，鉴定后得到阳性重组质粒80! 。对 重组质粒插入的目的基因片段进行序列分析和比较，结果表明0456 河北分离株! 基因与国外 的2;=;1+ 、?.@@#A @ 、0B* 、(-1()) 株有 (+C 的同源性；推导的氨基酸序列同源性 (+C 。 % % 0456 ! 基因的克隆及序列分析，为其蛋白质的表达分析提供了重要依据，也为进一步讨论该病 毒的分子生物学特性奠定了理论基础。 ［关键词］ % 猪传染性胃肠炎病毒；! 基因；分子克隆；序列分析 % % 猪传染性胃肠炎病毒（0EFGHIGGI7J KEGLM1 猪睾丸（.PIF LGLIRJ ，.0 ）细胞为徐福州博士惠赠。 FLILIG NI;G MO GPIF ，0456 ）属冠状病毒属成员， $ #% 质粒与菌种% 89:’10 质粒载体购自大连 0EFGHIGGI7J KEGLM1 可导致猪传染性 胃肠炎（ 宝生物有限公司。感受态细胞S9( 购自北京天 FLILIG ，045 ）的发生。045 是猪的一种急性高度 为时代公司。 接触性传染病［］，临床特征为严重腹泻、呕吐和脱 $ )% 主要试剂% /!, 提取试剂盒0ITMJ /EKFL ， 水，对# 周龄以内的仔猪具有高度的致死率（可达 购于 UFNILMKF 公司；反转录酶，/!, 酶抑制剂， C ），对养猪业危害严重。0456 基因组为单股 0EV 聚合酶，0 :!, 聚合酶，限制性内切酶!#W 、 * ! 正链不分段/!, ，大小为# $ ’- Q * 78 ，平均分子 $% 等均购自大连宝生物工程公司；959 培养基， ! 质量为- $ ’ Q - ;［# ］；其结构蛋白主要包括纤突糖 购自4I7RM 公司；胎牛血清，购自兰州民海生物工 蛋白（. ）、整合膜蛋白（9 ）、核衣壳蛋白（! ）和小 程有限公司；小量质粒提取试剂盒，购自北京天为 ［) ］ 结构蛋白（.H ） 。! 蛋白在不同地区的0456 分 时代公司；胶回收纯化试剂盒，购自61KF 生物有 离株中均高度保守，这为以! 蛋白作为该病的诊 限公司。 断依据提供了理论基础。! 蛋白在病毒的致病性 $ *% 引物设计% 根据 4FXEFY 报告的! 基因序 ［* ］ ［+ ］ 及病毒的复制 和转录 过程中也发挥重大作 列，应用2IH + $ 软件设计一对引物，并引入限 用。本试验通过对0456 ! 基因的克隆及序列分 制性内切酶!#W