uplc-sms检测人体生物样本etheno-dna加合物的方法研究.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 DNA作为细胞生命活动最重要的遗传物质，保持其分子结构的稳定性和完 整性对于细胞活性和生理功能的正常发挥具有重要意义。DNA氧化损伤主要是 活性氧自由基及其代谢产物攻击DNA，并与DNA碱基结合形成加合物引起的。 DNA是内源性及外源性如辐射和化学氧化剂诱导引起的活性氧自由基进攻细 胞的主要目标，DNA加合物可以作为生物标志物来反映化学致癌物到达靶位的 内接触剂量，也可以作为一种效应标志物，反映DNA受到化学致癌物损伤的 效应剂量。因此，建立高灵敏度、高特异性的DNA加合物检测方法是毒理学 研究的热点之一． 本文利用超高效液相色谱．三重四极杆串联质谱，建立了人群生物样本(血、 尿)中1 加合物的检测方法，该方法利用同位素标记的【15N5】￡dA和【15N3]sdC作为内标， 具有高灵敏度、高特异性和高通量的特点，适用于大量样本的人群生物监测和 分子流行病学研究。研究内容主要包括以下三个方面： 对纯化后的标准品进行定量。合成的标准品作为内标和外标用于计算生物样本 中EdA和cdC加合物的量，校正生物样本前处理过程sdA和sdC加合物的回收 率。 2．生物样本(血、尿)的前处理方法的建立和优化：DNA加合物在人体 生物样本中含量很低(通常108个碱基中0．1．1个加合物)。建立高特异性、高 灵敏度的DNA加合物的检测方法，关键在于生物样本前处理方法的优化。本 研究采用micrococcal P1酶解结 endonuclcasc。spleenphosphodiestcrase,nucleasc 合RP．HPLC的方法。富集和纯化血中sdA和￡dC加合物；采用固相萃取富集 和纯化尿中的￡dA和8dC加合物。该方法具有简便易行、回收率高的特点，尿 率分别为：83．7±7．1％和83．3±2．9％。 中文摘要 3．建立和优化UPLC．MS／MS的条件，检测生物样本中etheno．DNA加合物： 采用ESI正离子模式和多反应监澳Y(MRM)方法，建立了检测人体生物样本中 etheno-DNA加合物的方法。该方法具有高灵敏度、高特异性和高通量的特点， 尿液中￡dA和￡dC检测限为：0．51finol／ml和0．63fmol／ml=血液中uiA和cdC fmol／ml 检测限为：O．65finol／ml和0．83 关键词。DNA加合物：超高效液相．三重四极杆串联质谱；生物标志物：生物 监测 n Abstract DNAis itisof for themost material，and importantgenetic greatsignificance and molecular cell and functionto its of stability activity keep integrity physiological structure．DNAoxidativeWaS causedactive freeradicals mainly by oxygen damage andimmetaboliteswhichattackDNA．DNAisthemain that and