二色补血草LbST基因的克隆与功能分析.pdfVIP

摘要 摘要 植物谷胱甘肽硫转移酶(glutathione 育过程中都起着非常重要的作用。本研究从二色补血草cDNA文库中分离出一条谷胱甘 肽硫转移酶基因，将其命名为肋GST(FJ620899)。该基因eDNA全长987 bp，其中5’ 端含非编码区29 bp，3’端含非编码区307bp，开放阅读框全长651bp，共编码216个氨 基酸，该基因编码蛋白的分子量为24．5kDa，理论等电点为5．98，为酸性蛋白。氨基酸 序列分析表明，LbGST蛋白与其他植物GST的同源性较低。 采用实时荧光定量RT-PCR技术研究不同胁迫条件下，￡6傩丁基因在二色补血草中 细胞定位结果表明，LbGST-GFP蛋白分布在细胞核内。 重组表达载体的大肠杆菌在50kDa处出现了特异的融合蛋白，与预期结果一致，证明 了GST与LbGST融合蛋白的表达。 基因对多种胁迫(NaCl、NaHC03、低温、PEG、高温和紫外线)具有耐受能力。 为进一步验证￡6GS瑾因在盐胁迫下的功能，将其转入烟草中。随机选取5个转基 因株系进行NaCl胁迫试验，分析逆境胁迫条件下非转基因烟草和转基因烟草的谷胱甘肽 酶活性以及脯氨酸含量高于非转基因烟草，而MDA含量比非转基因烟草低。另外， 肋回礴因的过量表达扰乱了转基因烟草对于K+的吸收，但有效地抑制了转基因烟草对 Na+的吸收，使得转基因烟草在盐胁迫条件下始终保持较低水平的Na+。这些结果说明， LbGS瑾因的过量表达可能减少了过氧化反应以及膜受损害程度，提高和保护了其他一 些与活性氧清除相关酶的活性，从而增强了植物的抗逆能力。 关键词二色补血草；谷胱甘肽转移酶；非生物胁迫；耐盐能力 Abstract Abstract Plant an rolein stress glutathioneS-transferases(GSTs)playplant responses important and the novelGST growthdevelopment．Inpresentstudy,a gene，designated Limonium number clonedfrom FJ620899)，WaS The eDNA ofLbGSTis987 in 29 ofthe5’ full-lengthsequence bp length,includingbp and untranslated307 ofthe3’untranslated region bp region．Theopenreadingflame(ORF)is 651 in adeducedaminoacid of216residuesmolecular bp length,encoding sequence witha of24．5kDaandanisoelectricof weight point5．98．Mutiplesequencalignmentanalysis thatthe betweenLbGSTandotherGSTsfromother waslow． suggestedhomology plants the LbGSTin abioticstressW