牛磺酸对大鼠肾血再灌注损伤的保护作用及其机制.pdfVIP

摘要 摘要 ischemia 肾缺血再灌注损伤(renal injury，RIRI)是导致缺血性急 reperfusion renal 性肾衰竭(acutefailure，AI讧)的主要原因，肾小管上皮细胞凋亡是其重要 reticulum 发生机制之一。过度的内质网应激(endoplasmicstress，ERS)可引起细 胞凋亡，参与肾缺血再灌注损伤。牛磺酸(taurine，Tau)具有调节细胞内钙稳态、 抗炎和抗氧化等作用。本实验旨在建立大鼠肾小管上皮细胞株NRK．52E缺氧复 从内质网应激角度，研究牛磺酸对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及真机制， 为临床上防治’肾缺血再灌注损伤提供实验依据。 本课题研究包括以下三个部分： 第一部分：不同的缺氧复氧时间对肾小管上皮细胞的影响。 目的：建立一个较理想的肾小管上皮细胞H／R模型并筛选出一个合适的肾小 管上皮细胞H／R时间。 方法：以大鼠肾小管上皮细胞株NRK．52E为研究对象，建立H／R模型。实验 组。①细胞计数及计算细胞存活率(台盼蓝排斥试验)；②检测培养基中LDH 含量；③RT．PCR检测Caspase．12mRNA的表达。 结果：①活细胞计数和细胞存活率随着缺氧时间的延长逐渐降低，至缺氧 12h时达最低值，细胞复氧后活细胞计数和细胞存活率进一步减少，于H12瓜12 时达到最低值。②WR组细胞培养基中LDH含量随着缺氧时间的延长而明显高于 相应正常对照组，且在缺氧12h时达到最高峰。复氧后LDH含量逐渐上升，至 H8／R12时相点升高最为显著，至缺氧12h时又有所降低，但仍显著高于正常对照 组。 结论：经过缺氧8h复氧12h操作，得到了一个较理想的肾小管上皮细胞H／R 模型。 第二部分：牛磺酸对肾小管上皮细胞H／R的保护作用及其机制。 目的：探讨牛磺酸对肾小管上皮细胞H／R的保护作用及其具体作用机制。 方法：以NRK．52E为研究对象，实验分为正常对照组、H瓜组和H／R+Tau组。 摘要 2。H瓜+Tau组：于培 2mRNA表达最高时的时间点Hg／R1 H／R时间选择Caspase．1 细胞计数及计算细胞存活率(台盼蓝排斥试验)：②流式细胞仪检测肾小管上 的蛋白表达。 结果：①各浓度牛磺酸处理组活细胞计数及细胞存活率明显高于H／R组。② 明显升高，与H／R组相比，牛磺酸处理后平均胞内游离Ca2+荧光强度值下降显著。 H／R组凋亡率显著升高，各浓度牛磺酸处理组凋亡率与H／R组相比有显著性下降 白表达与正常对照组相比均显著增高，各浓度牛磺酸处理组与H／R组相比有显著 性下降，且呈现一定的剂量依赖性。 结论：牛磺酸对肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤具有一定的保护作用，其机 制主要是通过缓解胞浆钙超载并对葡萄糖调节蛋白GI冲78和细胞凋亡相关基因 Caspase．12、Caspase一3的表达有着不同程度的下调作用。 第三部分：牛磺酸对大鼠急性RIRI的保护作用及其机制。 目的：探讨牛磺酸对大鼠急性砌对的保护作用及其具体作用机制。 方法：以SD大鼠为研究对象，实验动物随机分为假手术组(Sham组)、I／R (BUN)和肌酐(Cr)；②电镜观察肾小管上皮细胞超微结构改变；③HE染色 表达。⑤免疫组化检测GRP78、Caspase．12、Caspase．3的蛋白表达。 结果：①缺血再灌注损伤能够明显降低肾功能，FR组血BUN，Cr水平显著 镜观察发现缺血再灌注后肾组织严重损伤，而牛磺酸给药组损伤显著减轻。③VR I／IHTau组与I瓜组相比有显著性下降。 结论：牛磺酸对大鼠缺血再灌注后内质网应激介导的肾缺盘再灌注损伤具 有较好的保护作用。其分子机制主要是通过下调葡萄话谒节蛋白GRP78及内质网 lU