牛磺酸对肿瘤细凋亡的作用及其机制初步研究.pdfVIP

摘要 摘 要 现如今，肿瘤是危害人类健康最严重的疾病之一。在我国，近年来恶性肿 瘤已成为死因谱中第一位的死亡原因，严重危害人们的健康和生命。因此，肿 瘤的预防和控制已经成为当前最重要的卫生工作之一。研究表明，人类约有 40％～60％的肿瘤是由化学因素引起的，而化学因素又主要与饮食有关。因此， 对肿瘤的膳食预防是一项积极的防癌策略。近几年，膳食中的抗癌、防癌物质 已经成为肿瘤化学预防的研究热点。牛磺酸(Taurine，Tau)是具有简单化学结构 的含硫氨基酸。人体内Tau的含量较高，约占人体体重的O．1％，几乎全部以游 离形式存在于所有脏器中。大量的国内外研究及临床应用发现，Tau具有广泛的 生理功效，是机体内源性抗损伤物质，但是关于Tau抗肿瘤作用方面的研究较少， 作用机制也尚未明确。 目的： 观察Tau对肿瘤细胞凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制。 方法： 检测Tau对肿瘤细胞生长的影响。实验采用4株肿瘤细胞和1株人正常细胞， mM、10mM、20mM、40mM、80 用不同浓度(0 mM、160mM)的Tau分别 处理4株肿瘤细胞和人胚肾细胞一定时间后，MTT检测其细胞活性的改变；应 用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率的改变；应用Hoechst33342核染法观察肿瘤 细胞凋亡的形态学改变；RT-PCR和Westemblot方法检测PUMA及凋亡相关基 的Caspase．3活性变化。 转染人结肠癌细胞LoVo，检测PUMA沉默后对Tau诱导肿瘤细胞凋亡的影响。 Control， 片段III，⑤阳性对照组(PositiveControl，PC)，⑥阴性对照组(Negative Tl 摘要 NC)，并转染48h后，用RT-PCR和Westernblot方法检测各组PUMA表达情况， 筛选出沉默效率较高的si．PUMA片段。为检测PUMA对Tau诱导肿瘤细胞凋亡 80mM组。实验于48h后，采 组，②NC组，Osi．PUMA组，@si．PUMA+Tau 用流式细胞术检测LoVo的细胞凋亡率；Westernblot方法检测PUMA及凋亡相 关基因BAX、Bcl．2蛋白的表达变化。 结果： 随着Tau浓度和处理时间的增加，4株肿瘤细胞的增殖活性均出现降低趋势， Tau对肿瘤细胞的抑制率出现逐渐升高趋势。计算Tau作用48h后的IC50发现， mM)比MDA—MB一231(p53吖一) 人乳腺癌细胞MCF．7(p53卅)的IC50(133．61 的IC50(127．21 raM)大4．76倍，提示Tau对p53十肿瘤 mM)比HT-29(p53乒)的IC50(45．66 24 h和48h后，其 细胞抑制作用更加明显。但Tau作用于正常人胚肾细胞293T h后的较高浓度组对293T细胞出现轻微抑 细胞活性并无显著性影响，只是在72 制，这就提示Tau对人正常细胞的增殖影响并不明显。流式细胞术结果发现，随 着Tau浓度的增加，两组肿瘤细胞的凋亡率均逐渐升高，并且p53士细胞比p53州+ 细胞的凋亡率增加更加明显，这与MTT结果相似。Hoeehst33342核染色发现， Tau 80ram处理48h后，肿瘤细胞的细胞核均出现不同程度的致密浓染或碎块状 致密浓染的典型的细胞凋亡形态。RT-PCR图像分析显示：随着Tau浓度的增加， mRNA表达水平都出现上调，抗凋亡 两组肿瘤细胞的促凋亡基因PUMA，BAX