大肠杆菌F18菌毛操纵子全基因克隆表达及生物学活性.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 !（）： # ’% ( ’! 年 月 日 $%% % ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! )*+,-./ $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 大肠杆菌!# 菌毛操纵子全基因克隆、表达及生物学活性 张建军，朱国强 （扬州大学兽医学院 扬州 $$#%%’ ） 摘 要：利用 技术以猪产肠毒素大肠杆菌 标准菌株 和 基因组 为模板成功地扩增出编码 KLM :9 %N90 $6!K 3O4 和 完整菌毛操纵子 基因。将它们分别克隆入表达质粒载体 （ ），结合酶切和核苷酸序列 :9;- :9;* ! # P=75$$- Q 分析证明了 预期扩增产物的正确性。然后将克隆的重组载体 转化至大肠杆菌 （ ），构建和筛选出 KLM 3O4 RS$ 3=6 分别含 和 完整 基因的重组菌，经过 诱导表达，在电镜下观察到上述两种重组菌能分别大量表 :9;- :9;* ! # TK7U 达:9;- 和:9;* 菌毛。用热抽提法提纯其诱导表达的:9;- 和:9;* 菌毛，经2325K4U= 电泳和考马斯亮蓝染色 发现提纯后菌毛获单一分子量约为 #V3; 蛋白条带，免疫家兔后制备出高效价的兔抗血清，玻板凝集试验和 W.X+./I -8,+ 结果表明：体外诱导表达的:9;- 和 :9;* 菌毛具有和野生:9 菌毛相同的抗原性。用表达 :9;- 和 菌毛的上述 株重组菌分别进行小肠上皮细胞体外吸附试验和吸附抑制试验，结果表明：株重组菌和野生 :9;* $ $ 菌株一样具有较强的粘附易感仔猪小肠上皮细胞的能力，而用表达:9;- 和:9;* 重组菌提纯的菌毛制备出兔抗 血清都能有效地抑制上述重组菌或野生菌株对易感仔猪小肠上皮细胞的吸附结合。 关键词：产肠毒素大肠杆菌； 菌毛； 基因表达；生物活性 :9 ! # 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Y’66 4 %%%50$%’ $%% %#5%’%5%# 断奶仔猪腹泻（ ， 定居于特定段小肠并局灶性大量繁殖。 P,/*?I. P,X+5Z.;I?IB H?;//D.; =7=L :9;- ）和仔猪水肿病（ ， ）是 和 菌毛在体内外均可粘附小肠上皮细胞微绒 KW3 P,/*?I. .H.; H?X.;X. =3 $ :9;* 种导致仔猪发病死亡的重要传染病，是全球范围内 毛和刷状缘，