《实验五GST酶亲和层析及SDS-PAGE》.pdf

蛋白质分离纯化综合实验 工程菌中GST 酶的亲和层析分离 SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS）鉴定 Contents 1. 蛋白质分离纯化 2. 蛋白质的鉴定分析 2 2012-11-20 蛋白质分离纯化的方法  根据蛋白分子特异性的差异，如分子大小 ，溶解度，电荷等 建立起来的。 性 质 方 法  分子大小 透析、超滤 、密度梯度离心、凝胶过滤  溶解度 等电点沉淀、盐析、有机溶剂沉淀  电荷 电泳、离子交换层析  吸附性质 吸附层析(羟基磷灰石层析、疏水作用层析)  对配体分子 亲和层析 的生物亲和力 3 2012-11-20 蛋白质分离纯化 1 ．电泳法 盐析法 2 ．层析法 聚乙二醇沉淀法 3 ．沉淀法 等电点沉淀法 4 ．透析、超滤 有机溶剂沉淀法 5、离心 热变性沉淀法 6 、结晶 4 2012-11-20 一、粗分级分离  主要是利用盐析法、等电点沉淀、 有机溶剂沉淀等方法，使目的蛋白 与其它较大量的杂蛋白分开，这些 方法的特点是简便、处理量大、既 能除去大量杂质，又能浓缩蛋白 质 ，但分辨率低。 5 2012-11-20 （1）盐析(Salting-out) 向蛋白质溶液中加入大量的中性盐 4 2 4 ， [(NH ) SO 2 4 ， 等 ，使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀。 Na SO NaCl ] 常用的盐析剂是硫酸铵，其盐析能力强，水中溶解度 大，浓度高时也不会引起蛋白质活性丧失。  盐析作用是由于当盐浓度较高时，盐离子与水分子作用，使 水的活度降低，原来溶液中大部分的自由水转变为盐离子的水 化水，从而降低蛋白质极性基团与水分子之间的作用 ，破坏蛋 白质分子表面的水化层。 盐析沉淀的蛋白质仍保持天然构象，即仍有活性。 6 2012-11-20 7 2012-