RNA同时干扰四个不同基因对鼻咽癌细胞CNE-2Z生长增殖实验及研究.pdfVIP

·751· 生垡豆墨塑噬叁塑窆E型盘壶垫!Q笙!县筮箜鲞筮!翅￡丛!』Q鲤堂!坐坚!堡蝗生坐鱼塑嬖!塾骘：塞鲤垫坠竺垫!Q。迎：箜，№：! ．论著． RNA同时干扰四个不同基因对鼻咽癌 细胞CNE一2Z生长增殖的实验研究 宋英董明敏杨海峰 【摘要】 目的应用RNA干扰技术构建一个载体同时编码四个基因，即血管内皮生长因子 (VEGF)、致癌基因蛋白(c．myc)、存活素(survivin)和端粒酶反转录酶的短发夹重组质粒，并与单基因 质粒做对比，通过体内外实验，研究其对鼻咽癌细胞CNE-2Z生长增殖的影响。方法构建同时表达 VEGF、C-myc、survivin和端粒酶反转录酶并含荧光索标记的短发夹RNA质粒命名为P．1，并构建单独 表达VEGF、c—myc、survivin和端粒酶反转录酶的质粒，分别命名为P_2、P-3、P-4和P-5，分别将其将转 染人鼻咽癌CNE-2Z细胞株及荷瘤裸鼠瘤体内。以激光共聚焦显微镜观察质粒在CNE-2Z细胞及瘤 体内的转染及表达情况。四甲基偶氮噻唑蓝法检测细胞增殖活性，实时PCR在mRNA水平上检测对 目的基因表达的抑制作用，免疫印迹法在蛋白水平上检测对目的基因的封闭效果，Transwell侵袭小 室模型观察导入CNE-2Z细胞对其恶性生物学行为的改变，流式细胞仪观察各组凋亡率，体内裸鼠成 瘤实验观察质粒对肿瘤的抑制效果。结果多基因干扰质粒转染鼻咽癌细胞后，CNE-2Z细胞增殖受 到明显抑制，体外侵袭能力显著下降(P值均0．05)。实时PCR证实多基因组4个不同基因mRNA 表达均降低，免疫印迹技术验证目的基因蛋白同时表达下调。流式细胞仪结果证明多基因凋亡率明 显高于单基因组(P值均0．05)。体内抑瘤实验表明，与阴性组和空白组相比，P-1组移植瘤生长明 显受到抑制(PO．05)，并且多基因质粒抑制肿瘤细胞增长的作用要强于单基因干扰质粒(P值均 0．05)。结论同时干扰多个基因能有效抑制鼻咽癌细胞增殖并诱导其凋亡，为鼻咽癌基因治疗奠 定了良好的实验基础。 【关键词】RNA干扰；基因疗法；鼻咽肿瘤；细胞系，肿瘤；细胞增殖 EffectsofRNAinterferencefourdifferentOHthe and of targeting genes growthproliferation carcinomaCNE-2Zcells SONG nasopharyngeal H昭，DON6胁ng—miraDepartmentof First of 450052，China Otorhinolaryngology，theAffiliatedHospitalZhengzhouUniversity，Zhengzhou Correspondingauth07：DDⅣcMing—min，Email：dmment@163．com the of To effectsRNA fourdifferent 【Abstmct】0bjectlveexplore interference(RNAi)targeting the and of carcinoma genes(VEGF，c—myc，survivin，hTERT)ongrowthproliferationnasopharyngeal cells．MethodsPlasmid-1allfour and5 (NPC)CNE-2Z targeted genes，plasmid-2，3，4targetedVEGF， andh‘rERT weretransfected